商品属性:

产品名称 | 锦鲤疱疹病毒(KHV)检测试剂盒(恒温荧光法) | 检测方法 | 荧光PCR法 |
货号 | XG-P1260 | 应用范围 | 核酸的定性检测 |
规格 | 50T | 用途 | 仅供科研研究实验 |
检测目的与重要性

检测目标: 锦鲤疱疹病毒。这是一种对锦鲤和普通鲤鱼具有高度传染性和极强致病性的病毒,死亡率可达80%-100%,给养殖业和观赏鱼业带来巨大经济损失。
重要性:
早期诊断与疫情控制: 在鱼群出现大规模死亡前快速检出带毒或潜伏感染的个体,及时隔离和处理,防止疫情爆发和蔓延。
引种与检疫: 对新引进的鲤鱼/锦鲤进行检疫,避免引入病原体。
健康监测: 对养殖场、交易市场的鱼群进行定期健康监测,建立生物安全体系。
国际贸易必备: 鲤鱼及其制品的国际贸易通常要求出具KHV阴性检测证明。
二、 方法学原理:恒温荧光法

恒温荧光法,通常指的是重组酶介导链置换核酸扩增技术(RAA) 或环介导等温扩增技术(LAMP) 与实时荧光检测的结合。其核心原理是:
恒温扩增: 与需要反复变温(热循环)的传统PCR不同,该技术在整个核酸扩增反应中仅需一个恒定的温度(通常为37-42℃)。
这依赖于特定的酶(如重组酶、链置换DNA聚合酶)在常温下即可高效启动和进行DNA复制。
实时荧光检测: 反应体系中包含针对KHV病毒特异性基因片段(如胸苷激酶基因、Sph基因等)的引物和荧光探针。当扩增反应进行时,探针被切割,释放出荧光信号。
随着目标DNA片段的大量复制,荧光信号随之增强。
实时监测: 恒温荧光检测仪器实时监测每个反应管内荧光信号的变化。当信号强度超过预设的阈值时,即可判定为阳性结果。整个过程通常非常迅速,在15-30分钟内即可完成。
三、 试剂盒典型组成

一个完整的KHV恒温荧光检测试剂盒通常包含以下组件:
KHV PCR反应液: 含有进行恒温扩增所需的酶(重组酶、聚合酶等)、dNTPs、缓冲液等。
KHV引物探针混合液: 包含针对KHV病毒基因高度保守区域设计的特异性引物和荧光探针。
阳性对照: 含有已知浓度的KHV基因片段,用于验证整个检测流程是否正常有效。
阴性对照: 不含KHV基因组的溶液(如无核酸酶水),用于监测是否存在污染或非特异性扩增。
DNA提取试剂(可能单独提供或包含): 用于从鱼体组织(鳃、肾、脾等)或黏液样本中提取病毒基因组DNA。
四、 检测流程

样本采集与处理:
样本类型: 优先采集鳃丝、肾、脾等病毒含量较高的组织,也可使用体表黏液或病变组织。
样本处理: 取少量组织(约20-50mg)进行研磨,或取黏液溶于特定缓冲液中。
病毒DNA提取:
使用试剂盒配套的DNA提取试剂,按照说明书步骤提取样本中的总DNA。提取的DNA作为后续扩增反应的模板。
反应体系配制:
在无菌的PCR反应管中,按说明书指定的体积依次加入PCR反应液、引物探针混合液和提取的DNA模板。小心混匀并短暂离心。
上机扩增与检测:
将反应管放入恒温荧光PCR检测仪中。
设置反应参数:温度通常设为39℃或41℃,时间设为15-20分钟,并选择正确的荧光通道(如FAM通道)。
启动程序,仪器开始恒温反应并实时监测荧光信号。
结果判读:
仪器软件会自动绘制实时荧光曲线,并根据阈值判断结果。
阳性: 样本管内出现典型的“S”型扩增曲线,且Ct值(荧光信号达到阈值时的循环数)小于设定的有效值。
阴性: 无扩增曲线或为一条平直的线。
对照有效性: 阳性对照必须为阳性,阴性对照必须为阴性,否则本次检测无效。
五、 技术优势与特点

快速高效: 从样本处理到出结果,通常在30-40分钟内完成,远快于传统PCR(需2-3小时)。
高灵敏度与特异性: 能够检测出极低拷贝数的病毒DNA,并且不会与其他常见鱼类疱疹病毒(如CyHV-1, CyHV-3)发生交叉反应。
操作简便: 无需复杂的PCR热循环仪,对实验人员和实验室条件要求较低,尤其适合现场快速检测(如养殖场、口岸现场实验室)。
闭管检测,防污染: 整个扩增和检测过程在密闭管中进行,大大降低了气溶胶污染的风险。
公司正在出售的产品:

胱抑素C/半胱氨酸蛋白酶抑制剂C抗体 | 细菌乳酸脱氢酶(LDH)总活性酶动力比色法定量检测试剂盒 |
组蛋白去甲基化Jarid1C抗体 | 载玻片细胞线粒体复合物I蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 |
微粒体谷胱甘肽S转移酶1抗体 | 通用型密执安棒状杆菌坏腐亚种(Clavibacter michiganensis subsp.sepedonicus;Cms)基因检测试剂盒 |
FITC标记人CD282 (TLR2)单克隆抗体 | 磷酸化转录接头蛋白EP300抗体 |
组织游离脂肪酸酶连续循环比色法定量检测试剂盒 | 多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶10抗体 |
血液乙酰酯酶活性化学发光法定量检测试剂盒 | 原钙粘附蛋白18抗体 |
纯化人体RUNX3基因重组表达载体(pcDNA-RUNX3) | ATP依赖RNA解旋酶DDX56抗体 |
胚胎干细胞胰岛细胞定向分化试剂盒 | 磷酸化蛋白激酶PKMYT1(Thr495)抗体 |
组织血管紧张素Ⅰ转化酶(ACE)总活性比色法定量检测试剂盒 | 氨基肽酶1抗体 |
兰花Lndeman培养基 | LOC103437570抗体 |
DNA清除试剂盒 | 锦鲤疱疹病毒(KHV)检测试剂盒(恒温荧光法)鱼类受精卵细胞冻存试剂盒(低温) |
天青素/肝素结合蛋白单克隆抗体 | 组织长链脂酰脱氢酶(ACYL COA DEHYDROGENASE)活性比色法定量检测试剂盒 |
胶原三股螺旋重复蛋白1抗体 | Ras相关GTP结合蛋白抗体 |
关键字: 锦鲤疱疹病毒;检测试剂盒;恒温荧光法;
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