人肺腺癌耐顺铂株带荧光素酶；A549/DDP/LUC (STR)
产品信息：
A549/DDP/LUC细胞是一种经过基因工程改造的细胞系，基于人肺腺癌A549细胞衍生的耐顺铂（DDP）株（A549/DDP）进一步转入荧光素酶（Luciferase）基因而构建。以下是其详细说明、培养操作和特性：
产品名称 | 人肺腺癌耐顺铂株带荧光素酶；A549/DDP/LUC (STR) | 英文名称 | A549/DDP/LUC：A549DDPLUC |
货号 | AXB10019 | 生长特性 | 贴壁生长 |
细胞背景与特性
来源与构建：A549细胞源自人肺腺癌组织，A549/DDP是通过长期暴露于顺铂诱导的耐药株，而A549/DDP/LUC则是在此基础上转入荧光素酶基因，用于生物发光成像（BLI）研究1
耐药性：对顺铂具有显著耐药性，可用于研究肺癌耐药机制及筛选逆转耐药的药物
荧光素酶表达：携带荧光素酶基因，可在加入底物荧光素（Luciferin）后发出生物荧光，适用于活体成像、细胞增殖、转移及药物疗效评估等研究
2. 培养操作
培养基：推荐使用含10%胎牛血清（FBS）和1%抗生素（如青霉素/链霉素）的RPMI 1640培养基。
培养条件：37℃、5% CO、饱和湿度的培养箱中培养。
传代步骤：
当细胞密度达到80%-90%时，弃去培养上清，用无钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
加入2 mL胰酶（0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA）消化细胞，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞变圆并脱落。
加入含血清的培养基终止消化，轻轻吹打细胞，收集细胞悬液。
1000 RPM离心4分钟，弃去上清，加入新鲜培养基重悬细胞。
按1:2至1:4的比例传代至新的培养瓶中。
冻存与复苏：
冻存：细胞密度达到80%-90%时，用胰酶消化细胞，离心收集细胞沉淀，重悬于含10% DMSO和90%冻存培养基（如FBS）的冻存液中，分装至冻存管，标记后置于程序降温盒中，放入-80℃冰箱过夜，最终转移至液氮罐中长期保存。
复苏：从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中融化，离心收集细胞沉淀，弃去冻存液，用新鲜培养基重悬细胞，接种至培养瓶中，置于37℃、5% CO培养箱中培养。
3. 应用
耐药机制研究：探究顺铂耐药相关分子机制，如药物外排泵、DNA修复能力等。
药物筛选与评价：筛选逆转耐药的化合物或天然产物，评估新药对耐药肿瘤细胞的疗效。
肿瘤生物学研究：利用荧光素酶报告系统研究细胞增殖、凋亡、侵袭和转移等生物学行为。
活体成像：通过生物发光成像技术实时监测肿瘤生长、转移及治疗反应，适用于动物模型研究。
基本操作步骤：
原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。
传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。
冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。
培养操作要点：
基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。
培养条件设置：
温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。
pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。
CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。
渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。
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具体特点如下：
环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。
生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。
传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。
敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。
应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。
关键字： A549/DDP/LUC;人肺腺癌耐顺铂株带荧光素酶;贴壁细胞;
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