人25-羟基维生素D3(25-OH VD3)elisa试剂盒

一、检测原理‌

采用双抗体夹心法ELISA技术，通过预包被抗体捕获样本中的25-OH VD3，再与HRP标记的检测抗体结合，经TMB显色后测定吸光度（OD值），浓度与显色深度呈正相关‌

二、采用‌双抗体夹心法‌

微孔板预包被抗25-OH VD3抗体，形成固相抗体

依次加入样本、HRP标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物

通过TMB显色反应，450nm波长测定吸光度，浓度与显色深度呈正相关‌

三、试剂盒组成

‌核心组件‌：酶标包被板、标准品（1600ng/L）、酶标试剂、显色剂（A/B液）、终止液、浓缩洗涤液

‌辅助材料‌：封板膜、说明书、密封袋‌

四、样本要求

‌血清/血浆‌：需自然凝固后离心（2000-3000转/分），避免反复冻融

‌保存条件‌：-20℃短期保存，长期需分装冻存

核心检测原理

采用‌双抗体夹心法‌酶联免疫吸附试验（ELISA）技术：

‌固相抗体包被‌：微孔板预包被抗25-OH VD3单克隆抗体，形成固相捕获层‌。

‌抗原-抗体结合‌：样本中的25-OH VD3与固相抗体结合后，加入HRP标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物‌

试剂盒关键组件

‌酶标板‌：预包被抗25-OH VD3抗体‌。

‌标准品‌：提供梯度浓度（如2700 ng/L）用于绘制标准曲线‌。

‌显色系统‌：TMB底物液（A/B液）和终止液‌

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操作步骤

一、实验前准备

‌试剂平衡‌：将试剂盒从冰箱取出，室温（20-25℃）平衡30分钟，避免冷凝水影响结果‌。

‌样本处理‌：

‌血清/血浆‌：室温静置10-20分钟，2000-3000转/分离心20分钟，收集上清液‌。

‌避免反复冻融‌：分装保存于-20℃，使用前室温解冻并混匀‌。

二、标准品稀释

取原倍标准品（如1600 ng/L），按说明书梯度稀释（如800→400→200→100→50 ng/L）‌。

稀释液需使用配套标准品稀释液，避免交叉污染‌。

三、加样与孵育

‌加样顺序‌：

每孔加入100μL标准品或样本（空白孔加稀释液）‌。

37℃避光孵育90分钟，使抗原-抗体充分结合‌。

‌洗涤‌：

弃去孔内液体，用洗涤液洗板5次，每次30秒，拍干残留液滴‌。

四、酶标反应与显色

‌加入酶标抗体‌：每孔加100μL HRP标记抗体，37℃孵育60分钟‌。

‌洗涤‌：重复上述洗涤步骤‌。

‌显色‌：

每孔加100μL TMB显色液（A/B液混合），避光孵育15-30分钟‌。

加入终止液（如2M硫酸）终止反应，溶液由蓝变黄‌。