NADH-谷氨酸合成酶(NADH-GOGAT)测定试剂盒/分光光度法/48样

NADH-谷氨酸合成酶(NADH-GOGAT)测定试剂盒/分光光度法/48样

测定意义：

GOGAT 分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同构成 GS/GOGAT 循环，参与氨同化的调控。

测定原理：

GOGAT 催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸，形成两分子的谷氨酸；同时 NADH 氧化生成 NAD+， 340nm 吸光度的下降速率可以反映 GOGAT 活性大小。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)工作液的配制：在试剂二中加入 25mL 试剂一充分溶解混匀，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；现配现用（配好后3h 内用完）；

(2)取 0.1mL 样本和0.9mL 工作液于 1mL 比色皿中，混匀，加工作液的同时开始计时，在 340 nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 5 分 20 秒时的吸光度 A2 ，计算 Δ=A1-A2。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。