谷氨酰胺合成酶(GS)测定试剂盒/分光光度法/24样
测定意义:
GS(EC 6.3.1.2 )主要存在于植物中,是生物体内氨同化的关键酶之一,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺,不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性,而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。
测定原理:
GS 在 ATP 和 Mg2+存在下,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺进一步转化为 γ─谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下形成的络合物在540nm 处有最大吸收峰,可用分光光度计测定。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。测定步骤:在 EP 管中加入下列试剂
试剂名称(μL)
测定管
对照管
试剂一
400
试剂二
试剂三
175
样本
混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)准确水浴30min
试剂四
250
混匀,25℃室温静置 10min 后,5000g ,25℃离心 10min ,取上清液测定 540nm 处的吸光值 A 。△A=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
上海酶联生物科技有限公司
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