谷丙转氨酶/丙氨酸氨基转氨酶(GPT/ALT)测定试剂盒/微量法/48样
测定意义:
GPT(EC 2.6.1.2 )广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化氨基酸和酮酸转氨基反应,在氨基酸代谢中具有重要作用。此外,哺乳动物肝细胞 GPT 活性很高,当肝细胞坏死,GPT 释放到血液中,血清GPT 活性显著增高。因此,GPT 被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
测定原理:
GPT 催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应,生成丙酮酸和谷氨酸;加入 2,4-二硝基苯肼溶液,不仅终止上述反应,而且与酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在碱性条件下呈红棕色,可以在 505nm 读取吸光值并计算酶活力。
试验中所需的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。测定步骤:在 EP 管或在 96 孔板中加入下列试剂
试剂名称(μL)
测定管
对照管
待测样本
10
煮沸 10min 的待测样本
试剂一
25
蒸馏水
混匀后,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)准确反应 20min
试剂二
试剂三
240
混匀,室温(25℃) 放置 10min ,在 505nm 波长处测各管吸光度 A。ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
上海酶联生物科技有限公司
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