4-香豆酸：辅酶A连接酶（4CL)测定试剂盒60T/96样

4-香豆酸：辅酶A连接酶（4CL)测定试剂盒60T/96样

测定意义：

4CL是连接苯丙酸途径与木质素特异合成途径的关键酶，主要催化肉桂酸生成相应的肉桂酸辅酶 A 酯，是合成木质素与其他苯丙烷类化合物的代谢流向调控点。该酶主要存在于高等植物、酵母和菌类中，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机

理，为减少水果石细胞含量而提高其品质提供依据。

测定原理：

4CL 催化 4-香豆酸和CoA 生成 4-香豆酸 CoA，在 333nm 下测 4-香豆酸 CoA 生成速率，即可反映 4CL 活性。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV

板）、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：

1 、分光光度计或酶标仪 40℃预热 30min 以上，调节波长至 333nm，蒸馏水调零。
2 、准备 96 孔 UV 板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于 340nm 务必使用UV 板）。

3 、样本测定

(1)在试剂二中加入 10mL 试剂一充分溶解混匀，置于 40℃水浴预热 10min；现配现用（配好后 24h 内用完）。

(2)在微量石英比色皿或 96 孔 UV 板中加入 10μL 样本和 190μL 试剂二，混匀，立即记录 333nm 处初始吸光值 A1 和 40℃反应 30min 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。