Human ALT ELISA Kit（96T）
检测原理： 信裕生物生产的 ELISA 试剂盒采用“夹心法”: 将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的 靶蛋白，生物素化的检测抗体与靶蛋白结合， SABC 复合物与生物素化检测抗体结合，形成免疫复合物， 加入 TMB 显色液后，若反应孔中有靶蛋白则显蓝色， 加入终止液变黄色，检测过程中游离的成分均被洗去， 用酶标仪在 450 nm 处测 OD 值，靶蛋白浓度与 OD 值 之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白 的浓度。
试剂盒组分: （保存温度4℃）
名 称 | 规格（48 T） | 规格（96T |
预包被酶标板 | 8×6条 | 8×12条 |
标准品 | 1支 | 1支 |
标准品/样品稀释液 | 10ml | 15ml |
生物素化检测抗体 （100×） | 60ul | 120ul |
生物素化检测抗体稀释液 | 6ml | 12ml |
SABC复合物 | 6ml | 12ml |
TMB显色液（A/B） | 各3ml | 各6ml |
终止液 | 6ml | 12ml |
20×浓缩洗涤液 | 30ml | 60ml |
封板胶纸 | 2张 | 4张 |
产品说明书 | 1份 | 1份 |
标本收集与试剂准备:
1. 血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原，无 内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可）， 血清、血浆避免使用溶血，高血脂标本，标本悬 浮物应离心去除，使标本清澈透明。待测样本应 尽早检测，2-8℃保存 48 小时；更长时间须冷冻 （-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。
2. 洗涤液配置：用蒸馏水 1:20 稀释（例：1ml 浓 缩洗涤液加入 19ml 的蒸馏水）
3. 标准品配制：取 8 个 1.5ml 离心管，分别标注 S1,S2,S3,S4,S5,S6，S7,blank,第一管 S1 中加 入标准品/样品稀释液 900ul，第二至第八管中 分别加入标准品/样品稀释液 200ul，在第一管 中加入（2000ng/ml）标准品溶液 100ul 置于漩 涡混合器上混匀后用加样器吸出 200ul，移至第 二管，如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出 200ul 弃去，第八管为空白对照。标准曲线浓度 为: 200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、0 ng/ml （标准品的用量及标准曲线范围也可根据自己 需要配置）。
4. 生物素化抗体工作液配置:使用前 20 分钟，用生 物素化抗体稀释液将 100×生物素化抗体稀释 成 1×工作液，根据所需用量配置，当日使用， 剩余弃之。
5. TMB 显色液的配置：使用前 10 分钟，将 TMB 显 色液 A 液和 B 液 1：1 混合，避光放置备用。 6. 如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最 高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍 数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。
检测程序:
1. 加样：空白孔加入 50μl 标准品/样品稀释液， 其余孔各加入标准品或待测样品 50ul，将反应 板混匀后置 37℃，40 分钟。
2. 洗板：用 1×洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次， 每孔加入 1×洗液 350μl，每次震荡/浸泡 1-2 分钟，向滤纸上印干。
3. 空白孔加入 100ul 生物素化抗体稀释液，其余孔 各加入 1×的生物素化抗体工作液 100ul，混匀 后置 37℃，30 分钟。
4. 洗板：同上。
5. 每孔加入 SABC 复合物工作液 100ul，混匀后置 37℃，20 分钟。
6. 洗板：同上。
7. 每孔加入提前配置好的 TMB 混合液 100ul，混匀 后置 37 ℃暗处反应 10-20 分钟（具体显色时间 根据显色结果而定）。
8. 每孔加入 100ul 终止液，混匀，30 分钟内用酶 标仪在 450nm 处测吸光值。
结果判断与计算：
1. 所有 OD 值建议减除空白孔值后再进行计算，如 空白孔 OD 低于 0.1，也可以直接计算。
2. 以标准品浓度作横坐标，OD 值作纵坐标，手工 绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品 OD 值计 算出相应含量，再乘以稀释倍数即可。
试剂盒性能:
1、 灵敏度:可测浓度小于 1.2ng/ml。
2、 特异性:同时可检测重组或天然的人 ALT，不与人 其它细胞因子有交叉反应。
3、 重复性:板内，板间变异系数均小于 10%。、
注意事项：
1. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测， 每次检测都应做标准曲线。
2. 洗涤过程很关键，洗涤不充分将导致精确度误差 及 OD 值错误地升高，从冰箱中取出的浓缩洗涤 液可能有结晶,属于正常现象，37℃水浴使结晶 完全溶解后再配制洗涤液。
3. 检测时所有试剂都要恢复到室温，板条开封后剩 余板条需封好，放回袋中 1 个月内用完。
4. 试剂盒使用超敏 TMB 溶液，显色过深时会出现沉 淀状，属正常现象，混匀即可，不影响结果判读。
5. 说明书以试剂盒内纸质版为准,本试剂盒仅用于 科研，不能用于临床诊断！
关键字： ALT;端粒延长替代途径;ALT ELISA Kit;人ALT ELISA试剂盒;
上海信裕生物科技有限公司是一家生物高新技术企业，主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销售。并代理销售AMRESCO、QIAGEN、GENWAY、SCIENCELL、MILLIPORE,EBIOSCIENCE,SIGMA、R&D、GBD、ATCC.HYCLONE等二十多家国内外知名品牌，致力于为广大高校、科研院所和企业单位提供的科研试剂和完善的技术服务，满足生物化学、分子生物学、细胞生物学、免疫学ELISA试剂盒等生物科技实验需求。上海信裕先后与天津中医学院、复旦大学、上海交通大学医学院、上海交通大学、华东师范大学、第二军医大学、南京大学，暨南大学，南京工业大学，曙光医院、华山医院、瑞金医院、上海有机研究所、中科院上海分院等多家单位建立了良好的合作关系。本公司可为您提供科研ELISA试剂盒，种属标本齐全,有专门针对人血清、血浆、全血、分泌物、尿液、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液等标本的试剂盒;另有针对各种动物(、免、牛、马、鸡、猪、狗、山羊、猴、鱼)的科研试剂。公司秉承“专注品质、信守承诺、积极沟通、创新服务的企业文化积极参与生物领域的技术创新和技术服务，力求为我国科研事业更好的，更专业的服务!