RB-Insulin:罗丹明标记胰岛素
RB-Insulin即罗丹明标记胰岛素,是通过共价偶联技术将罗丹明(RB,常用为四甲基罗丹明TRITC)与胰岛素分子结合形成的荧光标记生物分子。胰岛素是由胰腺分泌的多肽类激素,具有调节血糖代谢的核心生理功能,分子结构含多个可修饰的氨基和羧基位点,生物活性明确且来源可控;罗丹明是经典的红色荧光染料,激发波长约540-550nm,发射波长约570-580nm,荧光颜色呈鲜艳的橙红色,具有荧光量子产率高、光稳定性强、抗淬灭能力优良等特点,两者结合后既保留了胰岛素的生物活性,又赋予其荧光示踪功能。
该标记物的制备核心是实现罗丹明与胰岛素的高效特异性偶联,常用方法为异硫氰酸酯法。罗丹明衍生物(如TRITC)分子中的异硫氰酸酯基团可与胰岛素分子上的游离氨基(主要为赖氨酸残基上的氨基)发生特异性反应,形成稳定的硫脲键,实现共价结合。反应过程需严格控制条件:反应体系pH值维持在8.0-9.0,此环境可促进异硫氰酸酯基团与氨基的反应,同时减少胰岛素变性;反应温度控制在4℃,降低荧光染料淬灭风险和胰岛素活性损失;精准调节罗丹明与胰岛素的摩尔比(通常为2-5:1),确保标记率适中——标记率过高可能破坏胰岛素与受体的结合位点,影响生理活性;标记率过低则荧光信号强度不足,无法满足示踪需求。反应完成后,通过凝胶过滤层析(如Sephadex G-25)纯化,去除未结合的游离罗丹明,获得高纯度的RB-Insulin产物。
RB-Insulin凭借荧光示踪特性和保留的生物活性,在糖尿病发病机制研究、胰岛素作用通路追踪、药物筛选等领域应用广泛。在细胞水平研究中,可通过荧光显微镜观察RB-Insulin与细胞表面胰岛素受体的结合、内化过程,直观揭示胰岛素信号传导的起始机制;在组织水平研究中,可用于糖尿病模型动物胰腺组织的胰岛素分泌、转运规律观察,为胰岛功能评估提供可视化数据;在药物研发领域,可作为筛选工具,快速评价候选药物对胰岛素受体结合能力、胰岛素信号通路激活的影响,提高降糖药物研发效率。此外,在临床前药代动力学研究中,可通过荧光检测追踪RB-Insulin在体内的分布、代谢和排泄过程,为胰岛素制剂优化提供依据。
使用RB-Insulin时需注意以下事项:一是储存条件,需避光、密封置于-20℃低温环境保存,避免与氧化剂接触,防止荧光染料氧化失效,建议分装储存以避免反复冻融,保护胰岛素生物活性;二是检测参数调节,实验需使用匹配的荧光检测设备,调整激发光(540-550nm)和发射光(570-580nm)波长,确保高效捕捉荧光信号;三是活性验证,使用前需通过体外细胞实验(如胰岛素介导的葡萄糖摄取实验)验证其生物活性,避免因标记过程导致活性丧失;四是浓度控制,根据实验需求精准调节使用浓度,过高浓度可能引发非特异性结合,干扰实验结果;五是纯度验证,使用前通过凝胶电泳或高效液相色谱(HPLC)验证产物纯度,确保无游离罗丹明污染。
用途:科研
包装:瓶装
产地:西安瑞禧生物科技有限公司

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