RB-Protein A，罗丹明标记蛋白A，Rhodamine-Protein A

RB-Protein A 罗丹明标记蛋白A

RB-Protein A（罗丹明标记蛋白A）是将罗丹明（Rhodamine，简称RB）类荧光染料通过共价偶联技术标记到蛋白A（Protein A）分子上形成的荧光标记蛋白。蛋白A作为一种源自金黄色葡萄球菌的蛋白质，核心功能是可特异性结合多种哺乳动物IgG的Fc段，且不影响IgG与抗原的结合活性，这种结合具有特异性高、亲和力强、反应速度快等特点；罗丹明类染料（如罗丹明B、罗丹明6G）是一类高性能红色荧光探针，激发波长约550 nm，发射波长约570 nm，具有荧光亮度强、光稳定性好、荧光淬灭率低等优势，其红色荧光在生物组织中的穿透深度优于绿色荧光，且与绿色荧光探针（如FITC）的光谱重叠度低，适合多色荧光成像。RB-Protein A完美结合了蛋白A的IgG特异性结合能力和罗丹明的红色荧光示踪能力，是免疫检测、深层组织成像、多色分析等领域的重要工具。

该标记蛋白的制备需严格控制反应条件，以确保在引入罗丹明基团的同时，*大限度保留蛋白A与IgG的结合活性。常用的制备方法为活性酯法，具体步骤如下：首先选取pH 8.0-8.5的Tris-HCl缓冲液溶解蛋白A，该缓冲体系可维持蛋白A的天然构象，保障其Fc段结合活性；将罗丹明B-NHS酯（罗丹明的活性酯衍生物）溶解于少量无水DMSO中，缓慢滴加到蛋白A溶液中，控制罗丹明B-NHS酯与蛋白A的摩尔比在4:1-12:1之间，摩尔比过高易导致蛋白A表面氨基过度修饰，破坏其与IgG结合的活性中心，过低则荧光标记率不足，影响示踪效果；在室温、避光条件下温和搅拌反应2-3小时，期间罗丹明B-NHS酯的活性酯基团与蛋白A分子赖氨酸残基上的ε-氨基发生酰胺化反应，形成稳定的共价键；反应完成后，采用凝胶过滤层析（如Superdex 75层析柱）进行纯化，该方法可有效分离标记蛋白与游离的罗丹明染料、DMSO及未反应的杂质；纯化后需进行全面的质量检测：通过SDS-PAGE和HPLC验证蛋白纯度（纯度≥95%），利用荧光分光光度计测定荧光强度、激发/发射波长及罗丹明标记率，采用ELISA法检测蛋白A与IgG的结合活性，确保标记后蛋白A的IgG结合活性保留率≥90%，荧光信号稳定，无明显背景干扰。

RB-Protein A的红色荧光特性和IgG特异性结合能力使其在免疫检测、细胞成像、深层组织研究、多色荧光分析等领域具有独特应用价值。在免疫检测领域，可作为荧光探针用于免疫组化、流式细胞术、免疫印迹、荧光免疫分析等方法，特异性结合样本中的IgG抗体，通过红色荧光信号实现对目标抗原或抗体的定位与定量，尤其适合检测组织切片、细胞爬片等较厚样品中的目标分子，因为红色荧光穿透性更强，可减少样品自身对荧光信号的阻挡；在细胞生物学研究中，可用于细胞表面IgG受体的定位、表达量分析及动态追踪，通过红色荧光信号清晰观察受体的分布、内化及信号传导过程，为受体功能研究提供直观数据；在多色荧光成像研究中，由于罗丹明的红色荧光与FITC的绿色荧光光谱重叠度低，可将RB-Protein A与FITC标记的抗体、抗原等探针联合使用，实现多靶点的同时成像，例如同时观察两种不同抗原在细胞内的共定位情况，提高实验研究的维度；在临床前诊断研究中，可用于肿瘤标志物、病原体等的检测，借助其高特异性和强荧光信号，实现对微量目标分子的高灵敏度检测，为疾病的早期诊断提供支持；此外，还可用于抗体纯化、免疫沉淀、病毒颗粒示踪等场景。相较于绿色荧光标记的FITC-Protein A，RB-Protein A的红色荧光穿透性更强、背景干扰更小，且适合多色成像组合，在复杂生物样品和深层组织研究中具有明显优势，是生命科学研究中不可或缺的荧光免疫工具之一。

用途：科研

包装：瓶装

产地：西安瑞禧生物科技有限公司  

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