CY5-Lysozyme 荧光染料Cy5标记溶菌酶
CY5-Lysozyme是将近红外荧光染料Cy5与溶菌酶(Lysozyme)通过共价偶联形成的荧光标记蛋白。溶菌酶是一种广泛存在于动植物体液、组织及微生物中的碱性蛋白,具有特异性水解细菌细胞壁肽聚糖的活性,在机体天然免疫中发挥重要作用,同时其分子结构稳定、分子量较小(约14.3 kDa)、易于纯化,是生物医学研究中常用的模式蛋白;Cy5是一种经典的近红外荧光染料,激发波长约650 nm,发射波长约670 nm,具有荧光穿透性强、背景荧光干扰小、光稳定性好等优势,尤其适合生物样品的深层成像和活体示踪。二者结合形成的CY5-Lysozyme,既保留了溶菌酶的生物活性,又赋予其近红外荧光示踪能力,为溶菌酶的作用机制研究及相关生物检测提供了有力工具。
CY5-Lysozyme的制备需采用温和的化学偶联方法,以确保在引入荧光基团的同时不破坏溶菌酶的活性中心结构。常用的修饰剂为Cy5-NHS酯,其活性酯基团可特异性与溶菌酶分子赖氨酸残基上的氨基发生酰胺化反应,形成稳定的共价键。具体制备过程如下:首先将溶菌酶溶解于适宜的缓冲体系(如碳酸盐缓冲液,pH 8.0-8.5)中,确保蛋白处于天然构象;随后将Cy5-NHS酯溶解于少量有机溶剂(如二甲基亚砜,DMSO)中,缓慢滴加到溶菌酶溶液中,控制Cy5-NHS酯与溶菌酶的摩尔比在5:1-20:1之间,避免过量修饰导致蛋白聚合或活性丧失;在室温下避光反应1-2小时后,通过透析或凝胶过滤层析(如Sephadex G-25层析柱)去除未反应的游离Cy5染料和有机溶剂;纯化后的产物需进行一系列质量验证:采用SDS-PAGE验证蛋白纯度,通过荧光分光光度计测定荧光强度及Cy5标记率,利用比浊法或紫外分光光度法检测溶菌酶的抑菌活性,确保标记后溶菌酶的活性保留率不低于80%,以满足后续生物实验需求。
CY5-Lysozyme凭借其近红外荧光特性和溶菌酶的生物活性,在微生物学研究、免疫检测、活体成像等领域具有广泛应用。在微生物学研究中,可通过近红外荧光显微镜观察CY5标记的溶菌酶与细菌的结合过程,实时追踪溶菌酶对细菌细胞壁的水解作用,深入探究溶菌酶的*菌机制;在免疫检测领域,可作为探针用于溶菌酶相关抗体的检测,借助Cy5的近红外荧光信号,实现对微量抗体的高灵敏度定量分析,尤其适合复杂生物样品(如血清、组织匀浆)的检测,因为近红外光可有效穿透样品,减少背景荧光干扰;在活体成像研究中,可将CY5-Lysozyme注入实验动物体内,通过活体近红外成像系统实时监测其在体内的分布、代谢及清除过程,为溶菌酶类药物的药代动力学研究提供直观数据;此外,还可用于细胞内溶菌酶的定位与功能研究、细菌感染的早期诊断等场景。相较于可见光区荧光标记的溶菌酶,CY5-Lysozyme的近红外荧光穿透性更强、背景干扰更小,更适合深层组织和活体样品的研究,是溶菌酶相关基础研究与应用开发的重要工具。
用途:科研
包装:瓶装
产地:西安瑞禧生物科技有限公司

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