还原二硫键(-S-S-)
抗氧化保护
维持还原环境
蛋白质研究
SDS-PAGE电泳:预处理样品以打开蛋白质二硫键,确保充分变性。
蛋白质纯化:溶解包涵体或防止蛋白质聚集。
酶活性分析:保护酶活性中心的巯基不被氧化。
核酸处理
RNA提取:抑制RNase活性(需与螯合剂EDTA联用)。
DNA修饰酶反应:维持某些限制性内切酶或连接酶的活性。
细胞实验
细胞裂解液:防止蛋白间二硫键交联,提高提取效率。
细胞表面蛋白研究:裂解细胞前去除细胞膜蛋白的二硫键。
药物与诊断
抗体药物制备:还原抗体二硫键后进行片段化(如Fab制备)。
诊断试剂盒:保护试剂中的生物分子活性。
稳定性
DTT在酸性条件(pH < 7)下较稳定,但遇高温、碱性环境或金属离子易被氧化,需-20℃避光保存。
溶液需现配现用,或分装冻存(避免反复冻融)。
替代选择
对光敏感的实验中,可使用更稳定的类似物如三(2-羧乙基)膦(TCEP)。
浓度控制
常用浓度为1-10 mM,过高浓度可能干扰后续实验(如质谱分析)。
毒性
低浓度对细胞无毒,但高浓度(>10 mM)可能影响细胞活力。
湖北猫尔沃生物医药有限公司
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