荚膜组织胞浆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

荚膜组织胞浆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green荧光染料法，通过实时荧光定量PCR技术检测荚膜组织胞浆菌核酸。针对该菌种高度保守基因区域设计特异性引物，在扩增过程中释放荧光信号，通过仪器实时监测荧光强度，实现定性及定量分析。

产品特点

高特异性：引物针对荚膜组织胞浆菌保守序列设计，与其他病原体无交叉反应。

高灵敏度：检测限可达数百拷贝/反应。

便捷性：预混式试剂，即开即用，仅需提供待测核酸模板。

防污染设计：一管式闭管检测，避免扩增产物污染。

稳定性：-20℃保存，有效期12个月。

组分与储存条件

主要组分：

预混qPCR反应液（含SYBR Green染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物对

阳性对照（标准品）

阴性对照（无核酸酶水）

10×ROX校正染料（适配部分机型）

储存与运输：-20℃避光保存，低温运输。

操作步骤

试剂准备：

试剂解冻后轻弹混匀，短暂离心避免气泡。

按需稀释模板（建议Ct值20-30范围内）。

反应体系配置（20μL/反应）：

预混液10μL + 引物2μL + 模板5μL + 无核酸酶水3μL。

阴性/阳性对照需同步设置。

PCR程序（以常见仪器为例）：

预变性：95℃ 5分钟；

扩增循环（40次）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60℃至95℃，每0.5℃递增。

数据分析

定性检测：熔解曲线单峰且Ct值≤35判为阳性。

定量检测：以标准品Ct值绘制标准曲线，计算待测样本拷贝数。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，避免核酸污染。

建议设置技术重复（≥3孔）及阴性对照（NTC）。

不同仪器需调整ROX染料添加量（参照仪器说明书）。

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