134759-22-1，FITC-生物素，FITC-Biotin，异硫氰酸荧光素标记生物素，Biotin-FITC，Fluorescein Biotin

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一、核心结构与化学特性

1. 组成与连接方式
   FITC-Biotin 由两部分组成：

• FITC（异硫氰酸荧光素）：通过异硫氰酸酯基团（-N=C=S）与生物素的戊酸侧链羧基（5 号位）共价连接，形成稳定的硫脲键。

• Biotin（生物素）：保留其与亲和素 / 链霉亲和素（Streptavidin）的高亲和力结合能力（解离常数 Kd≈10⁻¹⁵ M），是目前已知最强的非共价相互作用之一。

• 异构体选择：通常使用异构体 I（5-FITC），因其更易纯化且荧光稳定性更高。

2. 分子参数

• CAS 号：134759-22-1

• 分子式：C₄₂H₅₀N₆O₈S₂

• 分子量：831.01 Da（部分文献报道质谱检测为 647.7 Da，可能因检测方法不同导致）

• 外观：绿色粉末

• 溶解性：溶于大部分有机溶剂（如 DMSO、DMF）和水，建议现用现配以避免降解。

二、关键特性

1. 荧光特性

• 激发 / 发射波长：最大激发波长 494-495 nm，最大发射波长 518-520 nm，呈现明亮的黄绿色荧光，适用于荧光显微镜、流式细胞术等检测设备。

• 荧光量子产率：约 0.42，具有较高的检测灵敏度。

2. 生物素 - 亲和素系统优势

• 高特异性：生物素与亲和素 / 链霉亲和素的结合具有高度特异性，可避免非特异性吸附干扰。

• 信号放大：通过链霉亲和素桥接，可将荧光信号放大 10³ 倍，适用于检测低丰度目标分子（如循环肿瘤细胞）。

3. 稳定性与标记效率

• 化学稳定性：在 - 20℃避光保存时，活性可维持数月；避免频繁冻融以防止荧光淬灭和生物素活性丧失。

• 标记兼容性：可通过异硫氰酸酯基团与生物分子（如蛋白质、抗体、核酸）的氨基反应，实现高效标记且不显著影响其生物活性。

三、应用领域

1. 生物分子标记与成像

• 蛋白质研究：用于标记抗体、酶等蛋白质，通过荧光成像追踪其在细胞内的分布和动态变化，或通过链霉亲和素磁珠捕获进行蛋白质相互作用分析。

• 核酸检测：标记 DNA/RNA 探针，用于荧光原位杂交（FISH）或微阵列芯片检测特定基因序列。

2. 细胞生物学研究

• 细胞表面标记：标记细胞表面受体或糖蛋白，通过流式细胞术或免疫荧光染色分析细胞亚群或信号传导通路。

• 细胞追踪：将 FITC-Biotin 标记的纳米颗粒或药物载体递送至细胞，实时监测其摄取和生物分布。

3. 蛋白质组学与高通量筛选

• 蛋白质微阵列：将 FITC-Biotin 固定于芯片表面，结合荧光扫描实现高通量蛋白 - 蛋白相互作用分析。

• 生物传感器开发：构建 FITC-Biotin / 链霉亲和素修饰的纳米通道或荧光共振能量转移（FRET）体系，用于检测生物标志物（如 miRNA、小分子药物）。

4. 药物递送与靶向治疗

• 靶向载体设计：将 FITC-Biotin 标记于脂质体、纳米颗粒等药物载体表面，通过生物素 - 亲和素相互作用实现肿瘤组织或特定细胞的靶向递送，并通过荧光成像评估递送效率。

• 药物释放研究：结合光敏基团开发可控释放系统，通过荧光信号动态监测药物在特定部位的释放过程。

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