大鼠骨涎蛋白(BSP)elisa试剂盒

1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠BSP的RGD（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）功能域和酪氨酸硫酸化修饰位点。预包被抗大鼠BSP单抗（靶向N端酸性区）捕获样本中的BSP，生物素标记的二抗（识别C端羟基磷灰石结合区）通过链霉亲和素-HRP系统催化TMB显色，450nm吸光度值与BSP浓度正相关。

2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  高亲和力单抗（Kd=0.25nM）

重组标准品  0-50ng/mL  -80℃  全长糖基化BSP（70-80kDa）

骨组织裂解液  20mL  -20℃  含EDTA/蛋白酶抑制剂

钙离子螯合剂  5mL  4℃  防止羟基磷灰石吸附

血清去磷酸化剂  10mL  -20℃  碱性磷酸酶抑制剂

 3. 性能参数

检测范围：0.78-50ng/mL（可扩展至200ng/mL）

灵敏度：0.23ng/mL（基于3SD空白值）

样本兼容性：

最佳：新生大鼠颅骨提取液

适用：血清（需1:10稀释）、牙周膜匀浆

交叉反应：

大鼠BSP：100%

小鼠BSP：32%

人BSP：<0.1%

精密度：

批内CV：5.8-7.2%

批间CV：8.3-10.1%

4. 样本处理规范

4.1 骨组织处理

剥离新生大鼠颅顶骨（P3-P5）

液氮速冻后研磨成粉

按1:19（w/v）加入冷裂解液

4℃旋转提取24小时

4.2 血清处理

使用硅化采血管

采集后30分钟内离心（3000×g，15min）

立即加入去磷酸化剂（1:10体积比）

4.3 特殊处理

矿化组织：需先脱钙（10% EDTA，pH7.4）

细胞培养：使用无血清成骨诱导培养基

5. 实验操作要点

标准曲线制备

梯度稀释：0、0.78、1.56、3.12、6.25、12.5、25、50ng/mL

复溶液：含5mM β-甘油磷酸钠的TBS

关键步骤控制

孵育条件：37℃恒温振荡（150rpm）

洗板液：含0.05% CHAPS的PBS

显色终止：1M NaOH（更稳定终止）

质控标准

空白OD值：≤0.07

最低检测限回收率：85-115%

钩状效应检测：样本稀释平行试验

6. 主要应用方向

骨代谢研究：骨质疏松模型评估

牙周再生：牙槽骨改建监测

骨肉瘤研究：肿瘤性骨基质分泌

种植体整合：钛表面成骨活性评价

7. 注意事项

样本特殊性

避免使用溶血样本（影响RGD检测）

骨样本需去除骨髓成分

干扰控制

高钙样本需预加螯合剂

含FBS培养基需透析处理

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