大鼠基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)elisa试剂盒

1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠TIMP-3的N端抑制域（12kDa）和C端结合域（21kDa）。预包被抗大鼠TIMP-3单抗（克隆号：MAB973）捕获样本中的TIMP-3，生物素标记的二抗通过链霉亲和素-HRP系统催化超敏TMB显色，450nm吸光度值与TIMP-3浓度呈正相关。

 2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  抗N端单抗（Kd=0.08nM）

重组标准品  0-100ng/mL  -80℃  糖基化全长TIMP-3（24kDa）

组织提取液  20mL  -20℃  含CHAPS去垢剂

血清稳定剂  5mL  4℃  含EDTA/蛋白酶抑制剂

MMP结合缓冲液  15mL  室温  含Zn2/Ca2

3. 性能参数

检测范围：0.312-20ng/mL（可扩展至100ng/mL）

灵敏度：0.09ng/mL（基于2SD空白值）

样本兼容性：

最佳：动脉粥样硬化斑块匀浆

适用：血清（需1:5稀释）、软骨组织

交叉反应：

大鼠TIMP-3：100%

TIMP-1：<0.01%

TIMP-2：<0.5%

精密度：

批内CV：4.2-6.1%

批间CV：7.3-9.5%

4. 样本处理规范

4.1 动脉斑块处理

分离主动脉弓斑块

按1:9（w/v）加入提取液

4℃旋转提取24小时

15000×g离心30分钟（4℃）

4.2 血清采集

使用硅化采血管

采集后1小时内离心（3000×g，15min）

立即加入稳定剂（1:10体积比）

4.3 功能验证

阳性对照：重组TIMP-3与MMP-9复合物

阴性对照：热灭活（56℃ 30分钟）样本

5. 实验操作要点

标准曲线制备

梯度稀释：0、0.312、0.625、1.25、2.5、5、10、20ng/mL

复溶液：含0.1% BSA的TBS

关键步骤控制

孵育条件：37℃恒温振荡（150rpm）

洗板液：含0.05% Tween-20的PBS

显色终止：2M HSO（50μL/孔）

质控标准

空白OD值：≤0.06

最低检测限回收率：90-110%

稀释线性试验：R2≥0.98

6. 主要应用方向

心血管疾病：斑块稳定性评估

骨关节炎：软骨降解抑制研究

纤维化疾病：肝纤维化逆转监测

肿瘤转移：EMT过程调控

7. 注意事项

实验设计

推荐同步检测MMP-9/TIMP-3比值

必须设置：正常组织对照

干扰控制

避免使用溶血样本（Hb>0.2mg/mL）

高脂样本需超速离心（12000×g，20min）

数据分析

推荐五参数logistic曲线拟合

组织数据需用总蛋白校正（ng/mg）

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