概述
应用范围:定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞培养上清液中的t-PA含量。
检测原理:采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA):
包被特异性抗体于微孔板;
加入样本或标准品,形成抗原-抗体复合物;
依次加入生物素化检测抗体和HRP标记链霉亲和素;
TMB显色(蓝色→黄色),450nm波长测OD值,浓度与吸光度呈正相关。
存储条件:未开封试剂盒冷藏(2-8℃),避免冻融。
有效期:6个月(生产日期见包装标签)。
产品名称 | 大鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Ratt-PA elisa kit |
分类 | Rat/大鼠Elisa试剂盒 | 检测范围 | 0.375ng/mL-24ng/mL |
灵敏度 | 0.1875ng/mL | 货号 | PR7484 |

试剂盒组成

(以96孔板为例)
包被微孔板:96孔 × 1块
标准品(冻干粉):2瓶(10000 pg/mL)
样本稀释液:1瓶(20mL)
检测抗体(生物素标记):1瓶(120μL)
酶结合物(HRP-链霉亲和素):1瓶(120μL)
TMB底物溶液:1瓶(10mL)
终止液:1瓶(10mL,含稀硫酸)
20×洗涤缓冲液:1瓶(30mL)
封板膜:2张
说明书:1份
样本处理要求

| 样本类型 | 处理步骤 |
| 血清 | 全血室温静置2小时后,1000g离心20分钟,取上清 |
| 血浆 | 抗凝全血(EDTA/肝素),采集后30分钟内1000g离心20分钟 |
| 组织匀浆 | 组织用PBS匀浆后,2000-3000转/分离心20分钟 |
| 细胞上清 | 直接1000g离心20分钟,取上清 |
注意:
避免溶血或反复冻融(-20℃保存需分装);
浑浊样本需再次离心后检测。
操作步骤

标准品稀释:
冻干粉用1mL样本稀释液溶解(10000 pg/mL);
梯度稀释:5000 pg/mL、2500 pg/mL → 至156 pg/mL(共7个浓度)。
加样与温育:
标准品/样本孔:加50μL → 空白孔:不加样;
检测抗体:每孔加100μL(空白孔除外);
封板膜覆盖,37℃孵育60分钟;
洗涤:
手工洗板:倒掉液体,注满1×洗涤缓冲液(20×浓缩液1:20稀释),静置30秒后弃去,重复5次;
显色与终止:
每孔加TMB底物100μL,避光室温(25℃)反应10分钟;
加终止液50μL,颜色由蓝转黄后30分钟内读板(450nm波长)。
结果计算

以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘制标准曲线(推荐四参数回归法);
样本浓度 = 标准曲线拟合值 × 稀释倍数。
注意事项

试剂保存:
酶结合物、TMB底物需避光保存,启用后尽快使用;
终止液含稀硫酸,避免接触皮肤。
操作规范:
不同批次试剂不可混用;
移液枪需精准校准(误差<5%);
显色时间避免超过30分钟。
应用限制:
仅供科研使用,不适用于临床诊断;
人源/鼠源样本勿交叉检测。
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关键字: 大鼠组织型纤溶酶原激活剂;t-PA;ELISA试剂盒;
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