大鼠纤连蛋白(FN)ELISA试剂盒

商品属性

用途

本试剂盒用于定量检测大鼠血清、血浆及相关液体样本中的纤连蛋白（FN）浓度，适用于科研用途，不可用于临床诊断。

检测原理

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。具体步骤如下：

包被：酶标板预包被大鼠FN单克隆抗体。

样本孵育：加入待测样本或标准品，FN与抗体结合。

标记抗体结合：加入生物素标记的抗FN抗体，形成抗体-抗原-标记抗体复合物。

酶联反应：加入链霉亲和素-HRP，与生物素结合。

显色：加入底物TMB（A/B液），在HRP催化下产生蓝色产物，终止液（酸）作用后转为黄色。

检测：450 nm波长下测定吸光度，样本FN浓度与吸光度值呈正相关。

试剂盒组成

预包被酶标板

FN标准品（浓度梯度）

生物素标记抗FN抗体

链霉亲和素-HRP结合物

洗涤缓冲液（浓缩液）

TMB显色底物（A/B液）

终止液

样本稀释液

封板膜

样本要求

血清/血浆：采集后离心去除颗粒物，-20℃保存，避免反复冻融。

细胞培养上清：离心去除沉淀，直接检测或分装冻存。

操作步骤

标准品梯度稀释，样本适当稀释。

每孔加入标准品或样本，37℃孵育1小时。

洗涤后加入生物素标记抗体，37℃孵育30分钟。

洗涤后加入链霉亲和素-HRP，37℃孵育20分钟。

洗涤后加入TMB显色，避光反应15分钟。

加入终止液，30分钟内测定OD450值。

计算与分析

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本FN浓度。

注意事项

试剂盒需在有效期内使用，不同批号组分不可混用。

避免反复冻融标准品或样本。

严格控制孵育时间和温度，洗涤时需彻底去除残留液体。

终止液为酸性溶液，操作时需佩戴防护用具。

性能参数

检测范围：通常为1.56–100 ng/mL。

灵敏度：≤0.5 ng/mL。

特异性：不与大鼠其他蛋白交叉反应。

储存条件

未开封试剂盒2–8℃保存；开封后根据组分要求分装保存（部分需-20℃避光）。

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