检测原理
采用双抗体夹心法。预包被抗人ICAM抗体捕获样本中的靶蛋白,加入HRP标记的检测抗体后形成复合物,通过底物显色反应测定450nm处吸光度(OD值),其强度与ICAM浓度呈正相关。
产品名称
人细胞间粘附分子(ICAM)ELISA试剂盒
英文名称
human ICAM elisa kit
分类
Human/人Elisa试剂盒
检测范围
7.5ng/mL-480ng/mL
灵敏度
3.75ng/mL
货号
PH23954
规格:48T/96T
保存条件:2-8℃避光保存,有效期6个月
试剂盒组成
预包被微孔板(96孔)
ICAM标准品(6浓度梯度,冻干粉或液体)
样本稀释液(40×浓缩液)
HRP标记检测抗体(100×浓缩)
洗涤缓冲液(20×浓缩)
底物A/B(TMB溶液)
终止液(2M硫酸)
封板膜
操作步骤
样本准备
血清/血浆:3000rpm离心10分钟,避免溶血。
细胞上清液:离心去除沉淀。
标准品与样本加样
标准品孔:加入50μL梯度标准品。
样本孔:10μL样本 + 40μL稀释液(终稀释倍数5×)。
空白孔:仅加稀释液。
孵育与洗涤
37℃孵育60分钟 → 弃液 → 每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复5次。
显色与终止
每孔加底物A/B各50μL,避光反应15分钟。
加终止液50μL,15分钟内测定OD450nm。
计算与分析
以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线。
样本浓度通过曲线方程计算,最终浓度需乘以稀释倍数。
注意事项
样本处理:避免反复冻融,2-8℃保存不超过48小时,长期保存需-20℃以下。
实验条件:室温平衡试剂30分钟,严格控制孵育时间和温度。
质量控制:建议设置复孔,CV值应<15%。
废弃物处理:终止液含强酸,需按生化废弃物规范处置。
性能参数
检测范围:0.1-50 ng/mL(具体以实际产品为准)
灵敏度:<0.05 ng/mL
特异性:与人ICAM-1/ICAM-2无交叉反应
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