人白介素12(IL-12)ELISA试剂盒

检测原理

用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），通过包被抗IL-12抗体捕获样本中的IL-12，再与HRP标记的检测抗体结合，经显色反应后测定吸光度（OD值），计算目标蛋白浓度。

试剂盒组成

预包被96孔板（IL-12特异性抗体）

IL-12标准品（不同浓度梯度）

样本稀释液

HRP标记检测抗体

洗涤缓冲液（10×浓缩液）

显色底物（TMB A/B液）

终止液（2M硫酸）

样本要求

样本类型：血清、血浆或细胞培养上清

体积：建议50-100μL/孔

保存：短期4℃保存，长期需-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。

操作步骤

平衡：试剂盒室温平衡20-30分钟。

加样：

标准品孔：加入50μL梯度标准品。

样本孔：10μL样本+40μL稀释液（终体积50μL）。

空白孔：仅加稀释液。

孵育：37℃孵育60分钟，洗板5次。

加酶标抗体：每孔加HRP标记抗体100μL，37℃孵育60分钟，洗板5次。

显色：加入TMB底物50μL/孔，避光反应15分钟。

终止与检测：加入终止液50μL/孔，15分钟内测定450nm OD值。

计算与分析

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本浓度。

性能参数

灵敏度：通常≤1 pg/mL

检测范围：15.6-1000 pg/mL（参考IL-10试剂盒范围调整）

特异性：不与IL-10、IL-6等其他细胞因子交叉反应。

注意事项

实验前确保所有试剂平衡至室温。

避免洗涤液残留，建议使用洗板机或充分手动洗板。

终止液为强酸，需谨慎操作。

试剂盒保存于2-8℃，有效期6个月。

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