商品属性
产品名称 | 人Apelin36蛋白(AP36)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Human AP36 ELISA Kit |
检测范围 | 18.75pg/mL-600pg/mL | 货号 | PH32950 |
预期用途
本试剂盒用于定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液或其他相关生物液体中的Apelin36蛋白含量，适用于科学研究用途，不适用于临床诊断。
检测原理
采用双抗体夹心法或间接法：
双抗体夹心法：
微孔板预包被纯化的抗Apelin36抗体，形成固相载体。
加入待测样本或标准品后，Apelin36与固相抗体结合。
依次加入生物素化抗Apelin13抗体和HRP标记的亲和素，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
洗涤后加入TMB底物显色，在HRP催化下产生蓝色产物，酸化后转为黄色。
450 nm波长下测定吸光度（OD值），浓度与OD值呈正相关。
间接法：
微孔板包被抗Apelin36抗体，加入样本或标准品后结合固相抗体。
加入生物素标记的二抗，再结合链霉亲和素-HRP，后续显色步骤同上。
检测范围
灵敏度：0.312–30 pg/ml。
样本类型：血清、血浆、细胞上清液等。
试剂盒组成
预包被微孔板：96孔或48孔（根据规格）。
标准品：冻干粉或液体，需用稀释液复溶后梯度稀释（如20 ng/ml起始浓度）。
检测抗体：生物素化抗Apelin36抗体。
酶结合物：HRP标记的链霉亲和素或亲和素。
显色底物（TMB）、终止液（酸性溶液）、洗涤缓冲液等。
样本处理要求
血清：室温凝固10–20分钟后，2000–3000 rpm离心20分钟，取上清。
血浆：建议使用EDTA或肝素抗凝，离心后取上清，避免反复冻融。
保存：2–8℃短期保存，-20℃或-80℃长期保存，避免溶血或脂血干扰。
操作步骤
标准品配制：按说明书梯度稀释（如20 ng/ml→0.312 ng/ml）。
加样：每孔加入样本或标准品100 μl，37℃孵育1–2小时。
洗涤：弃液后拍干，加入洗涤液清洗3–5次。
加检测抗体：孵育后洗涤。
加酶结合物：孵育30分钟，洗涤。
显色：加入TMB避光反应15–30分钟，加终止液后测定OD值。
结果计算
以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过回归方程计算样本浓度。
注意事项
试剂盒需在有效期内使用，不同批号组分不可混用。
避免反复冻融标准品或样本，操作时需佩戴防护用具。
显色时间需严格控制，终止后应在10分钟内读数。
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