商品属性
产品名称 | 人Agouti相关蛋白(AgRP)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Human AgRP ELISA Kit |
检测范围 | 15.625pg/mL-500pg/mL | 货号 | PH32952 |
产品用途
本试剂盒用于定量检测人血清、血浆、细胞上清液或组织匀浆等样本中人Agouti相关蛋白(AgRP)的含量，适用于科研用途。
实验原理
采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）：
包被抗体：微孔板预包被高纯度人TNF-α捕获抗体，形成固相抗体。
抗原结合：样本中的AgRP与固相抗体结合后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
显色反应：加入底物TMB（四甲基联苯胺），在HRP催化下生成蓝色产物，酸性终止液作用后转为黄色。
定量分析：在450 nm波长下测定吸光度（OD值），OD值与TNF-α浓度呈正相关，通过标准曲线计算样本浓度。
样本类型
适用样本：人血清、血浆（需抗凝处理）、细胞培养上清液、组织匀浆等。
样本处理：避免反复冻融，离心去除颗粒物，-20℃或-80℃保存。
试剂盒组成
预包被微孔板
AgRP标准品（梯度浓度）
HRP标记检测抗体
TMB显色液、终止液
洗涤缓冲液（浓缩液需稀释）
封板膜、说明书
操作步骤
标准品稀释：按说明书配制系列浓度标准品。
加样孵育：依次加入标准品、待测样本至微孔，37℃孵育。
洗涤：弃液后使用洗涤液清洗3-5次。
酶标抗体孵育：加入HRP标记抗体，37℃反应。
显色与终止：加入TMB避光显色，终止后30分钟内检测。
注意事项
试剂盒需2-8℃保存，避免冷冻或强光照射。
不同批次试剂不可混用，标准品需现配现用。
操作时需佩戴防护用具，避免接触终止液等腐蚀性液体。
结果计算
以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本浓度。若样本OD值超出标准范围，需适当稀释后复测。
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