商品属性
产品名称 | 人肾肿瘤抗原(RAGE)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Human RAGE ELISA Kit |
检测范围 | 0.156ng/mL-10ng/mL | 货号 | PH32978 |
检测原理
采用双抗体夹心法：
抗RAGE抗体预包被于酶标板，样本/标准品中的RAGE与之结合。
加入生物素化检测抗体，形成抗体-抗原-生物素化抗体复合物。
加入SA-BC（链霉亲和素-生物素）复合物放大信号。
加入TMB显色底物，蓝色显色后终止液变黄色。
在450nm波长下测OD值，RAGE浓度与OD值成正比（需绘制标准曲线计算浓度）。
样本要求
适用样本类型：血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液、尿液等。
样本处理：
液体样本（血清/血浆）：避免溶血或高血脂，4℃离心（3000rpm, 10min），分装后-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
组织样本：液氮速冻后匀浆，离心取上清分装保存。
细胞培养上清：1500rpm离心10min后立即分装冻存。
试剂盒组分（以96T为例）
| 名称 | 规格（96T） |
| 预包被酶标板 | 8×12条 |
| 标准品 | 1支 |
| 标准品/样品稀释液 | 15ml |
| 生物素化检测抗体（100×）| 120μl |
| SABC复合物 | 12ml |
| TMB显色液（A/B） | 各6ml |
| 终止液 | 12ml |
| 20×浓缩洗涤液 | 60ml |
| 保存条件：4℃避光（生物素化抗体工作液需现用现配）。
关键参数
检测范围：0.156–10ng/mL
最低检测限：0.066ng/mL
保质期：12个月
操作流程
标准品稀释：用稀释液进行7梯度对倍稀释（1/2至1/64），设置空白对照。
洗涤液配制：20×浓缩洗涤液按1:20蒸馏水稀释（示例：1ml浓缩液+19ml水）。
加样与孵育：
每孔加标准品/样本100μl，37℃孵育90分钟。
洗涤后加生物素化抗体（1×工作液），37℃孵育60分钟。
加SA-BC复合物，37℃孵育30分钟。
显色与终止：
加TMB显色液避光孵育15分钟（蓝色）。
加终止液（黄色），30分钟内测OD450值。
结果计算
以标准品浓度为横坐标、OD450值为纵坐标绘制曲线，拟合方程计算样本浓度。
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