大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶(ACP5)elisa试剂盒
一、核心检测信息

1. 检测原理
采用双抗体夹心ELISA技术,特异性识别大鼠ACP5的活性二聚体(35kDa)。预包被抗大鼠ACP5单抗(靶向铁结合结构域)捕获样本中的TRAP,生物素标记的二抗通过链霉亲和素-HRP系统催化PNPP(对硝基苯磷酸盐)显色,405nm吸光度值与ACP5活性正相关。
产品名称 | 大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶(ACP5)elisa试剂盒 | 货号 | XG-R1568 |
英文名称 | Rat ACP5 ELISA Kit | 规格 | 48T\96T |
核心组分
组分 规格 保存条件 关键特性
预包被板 96T 2-8℃(含干燥剂) 抗活性位点单抗(克隆号:6F3)
重组标准品 0-20U/L -80℃ 纯化破骨细胞提取物(NIBSC标准)
酒石酸抑制剂 1mL 4℃ 100mM L-(+)-酒石酸溶液
骨吸收缓冲液 20mL -20℃ 含10mM β-甘油磷酸钠
PNPP底物 10mL 4℃(避光) 5mg/mL预优化浓度
性能参数

检测范围:0.5-20U/L(可扩展至100U/L)
灵敏度:0.15U/L(基于3SD空白值)
样本兼容性:
最佳:破骨细胞培养上清
适用:血清(需1:2稀释)、骨磨片洗脱液
交叉反应:
大鼠ACP5:100%
前列腺酸性磷酸酶:<0.1%
溶酶体酸性磷酸酶:<0.5%
精密度:
批内CV:6.2-8.4%
批间CV:9.1-11.3%
样本处理规范

4.1 破骨细胞培养
大鼠骨髓单核细胞分离(密度梯度离心)
RANKL(50ng/mL)+M-CSF(25ng/mL)诱导7天
收集无血清培养上清
4.2 骨磨片处理
制备皮质骨磨片(5×5×0.2mm)
与破骨细胞共培养后,用0.1M NaOH洗脱
中和至pH7.0后立即检测
4.3 血清采集
使用红头促凝管
37℃凝固30分钟后离心(2000×g,15min)
避免溶血(影响铁离子检测)
实验操作要点

标准曲线制备
梯度稀释:0、0.5、1、2.5、5、10、20U/L
复溶液:含0.1% BSA的柠檬酸盐缓冲液(pH5.5)
关键步骤控制
孵育条件:37℃恒温(严格避光)
反应终止:1M NaOH(终止更彻底)
读数时间:精确控制30±0.5分钟
质控标准
空白OD值:≤0.10(405nm)
酒石酸抑制率:≥95%(特异性验证)
骨吸收阳性对照:≥15U/L
6. 主要应用方向
骨质疏松研究:破骨细胞活性评估
骨转移瘤:溶骨性破坏监测
关节炎:关节周围骨侵蚀
牙周病:牙槽骨吸收研究
注意事项

实验设计
推荐同步检测CTX-1(胶原降解标志物)
必须设置:假手术组/正常对照组
干扰控制
避免使用EDTA血浆(螯合Fe2)
高磷样本需透析处理
数据分析
推荐使用线性回归曲线拟合
骨吸收数据需用磨片面积校正
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