大鼠血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)elisa试剂盒

一、核心检测参数

检测靶标：大鼠ANGPTL4（50kDa分泌型糖蛋白，含N端寡聚化域）

检测原理：夹心ELISA（特异性识别N端 coiled-coil结构域）

动态范围：0.5-100 ng/mL（5.5个数量级）

灵敏度：<0.2 ng/mL（可检测脂肪细胞单次分泌）

样本兼容性：

脂肪组织匀浆（首选）

血清/血浆（EDTA抗凝）

肝脏组织裂解液

低氧培养细胞上清

 二、关键技术突破

抗体对设计：

捕获抗体：抗寡聚化域（Clone 4A2）

检测抗体：抗纤维蛋白原样域（HRP标记）

代谢状态识别：

特异性检测饥饿/低氧诱导的剪切体

排除ANGPTL3/8干扰（交叉反应<0.1%）

三、实验方案优化

低氧模型处理：

诱导条件：1% O,37℃,24h

上清收集：含10mM DTT（防氧化）

脂肪组织处理：

matlab

匀浆缓冲液=50mM Tris+1% NP-40

脂质去除：超速离心（100,000×g,1h）

标准曲线配置：

7点梯度（100-0.5 ng/mL）

推荐5参数logistic拟合

四、质量控制系统

参数  验收标准

批内CV  ≤6%

批间CV  ≤10%

剪切体回收率  90-110%

冻融稳定性  ≤3次

五、核心应用领域

代谢疾病：

非酒精性脂肪肝研究

胰岛素抵抗机制

心血管病：

动脉粥样硬化斑块稳定性

血管新生调控

肿瘤微环境：

肿瘤转移前龛形成

化疗抵抗研究

六、关键操作规范

特殊处理要求：

低氧样本需立即氮气保护

避免使用SDS（破坏寡聚体）

检测系统优化：

TMB显色时间=12±0.5min（严格避光）

终止后8min内检测

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