1. 试剂盒基本信息
检测目标:人L-选择素(L-Selectin/CD62L),一种细胞黏附分子,主要表达于白细胞表面,参与炎症和免疫应答。
检测方法:双抗体夹心酶联免疫吸附法(Sandwich ELISA)。
样本类型:血清、血浆(EDTA/肝素抗凝)、细胞培养上清、白细胞裂解液等。
灵敏度:通常≤0.1 ng/mL(不同品牌有差异)。
检测范围:常见0.156–10 ng/mL(部分试剂盒可达0.312–20 ng/mL)。
特异性:特异性识别人CD62L,不与E-选择素(CD62E)、P-选择素(CD62P)或其他黏附分子交叉反应。
产品名称 | 人L-Selectin/CD62Lelisa试剂盒 | 货号 | XG-H1678 |
英文名称 | Human L-Selectin/CD62L ELISA Kit | 规格 | 48T\96T |
2. 试剂盒组成
典型试剂盒包含以下组分(以96孔板为例):
预包被微孔板:抗人CD62L单克隆抗体包被的96孔板。
标准品:重组人CD62L蛋白(冻干粉或液体,梯度浓度:0、0.156、0.312、0.625、1.25、2.5、5、10 ng/mL)。
检测抗体:生物素标记的抗人CD62L二抗。
酶结合物:HRP标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。
显色底物:TMB(四甲基联苯胺)溶液。
终止液:1M或2M硫酸溶液。
洗涤缓冲液:10–20×浓缩PBS/TBS(含0.05% Tween-20)。
样本稀释液/封闭液:含1% BSA的PBS。
其他:封板膜、说明书、质控样本(高/低浓度)。
3. 检测原理
抗原捕获:样本中的CD62L与预包被抗体结合。
信号放大:生物素化二抗与CD62L结合,再通过HRP-链霉亲和素催化TMB显色。
定量分析:450 nm波长下测OD值,浓度与吸光度呈正相关。
4. 操作步骤(简化版)
标准品与样本准备:标准品复溶并梯度稀释,样本按说明书稀释(如1:5)。
加样孵育:100 μL/孔,37℃孵育1–2小时。
洗涤:用洗涤液洗板3–5次(每次浸泡30秒)。
加检测抗体:100 μL/孔,37℃孵育1小时。
加酶结合物:100 μL/孔,37℃孵育30分钟。
显色与终止:加入TMB避光反应10–15分钟,加终止液后30分钟内检测。
5. 数据分析
使用四参数逻辑(4PL)或对数拟合绘制标准曲线。
样本浓度需乘以稀释倍数,复孔CV值应<10%。
6. 应用领域
炎症研究:CD62L在白细胞迁移和炎症反应中起关键作用。
免疫疾病:自身免疫病(如类风湿关节炎)中CD62L表达异常。
癌症研究:肿瘤微环境中白细胞浸润的调控机制。
药物开发:评估抗炎或免疫调节药物对CD62L的影响。
7. 关键注意事项
样本处理:
血浆需离心去除血小板(避免假性升高)。
避免反复冻融(≤3次),分装保存于-80℃。
实验优化:
高浓度样本需进一步稀释(检测范围外需重测)。
若背景高,可增加封闭时间(如37℃封闭1小时)。
干扰因素:
溶血或脂血样本需预处理(超速离心或过滤)。
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