脱氧核糖核酸(DNA)检测试剂盒(二苯胺微板法)
简介:
脱氧核糖核酸中的α-脱氧核糖在酸性环境中变成ω-羟基-γ酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物,在595 nm处有最大的吸收,在每毫升含DNA 20~400微克范围内,光密度与DNA的浓度成正比,在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应的灵敏度。
核酸分子加热时产生2’-脱氧核糖,应形成羟基-γ-酮基戊醛,后者与二苯胺试剂反应产生蓝色化合物,酶标仪595比色检测吸光度,再与标准曲线对比。
BIOISCO 脱氧核糖核酸(DNA)检测试剂盒(二苯胺微板法)主要用于生物化学法-二苯胺法定量检测DNA含量,是由DNA标准溶液、二苯胺溶液和乙醛溶液组成。本产品仅适用于科研实验,不可做其他用途。
组成:
产品名称
KB019-100T
Storage
试剂(A):DNA 标准溶液(200μg/mL)
2×1ml
-20℃
试剂(B):二苯胺溶液
100ml
RT避光
试剂(C): 乙醛溶液
1ml
4℃
临用前试剂B:试剂C=100:1比例混匀即为二苯胺试剂。
说明书
一份
保存条件:
按要求保存,半年有效。
操作步骤(仅供参考):
(一)DNA 标准曲线的制作注意事项:
取6支试管,编号,按下表加入试剂
编号
0
1
2
3
4
5
DNA 标准溶液(ul)
100
200
300
400
500
蒸馏水(ul)
二苯胺试剂(ul)
1000
加毕,摇匀,于60℃恒温水浴中保温1小时,(或于沸水中煮沸15分钟,冷却测OD595 nm 值。)以光密度为纵坐标,DNA含量(ug/ml)为横坐标,绘制标准曲线。
(二)样品的测定
取2支试管,各加0.2毫升的待测液(内含DNA应在标准曲线可测范围之内)加蒸馏水稀释至0.5毫升,再加1毫升二苯胺试剂,摇匀,其操作步骤与标准曲线的制作相同。根据测得的光密度值,从标准曲线上查出相当该光密度DNA的含量,按下式计算出样品中DNA的百分含量。
DNA含量/毫升待测液=标准曲线查得值×稀释倍数
注意事项:
1、 二茉胺法测定DNA含量灵敏度不高,待测样品中DNA含量低于50 mg/L 即难以测定。乙醛可增加二苯胺法测定DNA的发色量,又可减少脱氧木糖和阿拉伯糖的干扰,能显著提高测定的灵敏度。
2、 样品中含有少量RNA并不影响测定,但因蛋白质、多种糖类及其衍生物、芳香醛、羟基醛等能与二苯胺反应形成有色化合物,故能干扰DNA定理。
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