商品属性
产品名称 | 兔IGFBP-7elisa试剂盒 | 英文名称 | Rabbit IGFBP-7 ELISA Kit |
检测范围 |
| 货号 | PR33798 |
检测原理
预包被在微孔板上的抗兔IGFBP-7特异性抗体捕获样本中的兔IGFBP-7。
加入生物素标记的抗兔IGFBP-7检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。
加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。
加入显色底物(TMB)，酶催化底物产生蓝色产物。
加入终止液终止反应，颜色由蓝变黄。
在特定波长(通常450nm，可能需要参考波长570nm或630nm)下测量吸光度(OD值)。
OD值与样本中IGFBP-7浓度成正比，通过标准曲线计算浓度。
目标种属： 兔 (Rabbit, Oryctolagus cuniculus)
血清 (Serum) - 最常见，可能需要稀释
血浆 (Plasma) - 推荐EDTA或肝素抗凝，避免使用柠檬酸盐
细胞培养上清液 (Cell Culture Supernatants) - 可能需要去除颗粒物
组织匀浆液 (Tissue Homogenates) - 提取方法需标准化，且可能需要更高倍稀释
(尿液、唾液等通常较少见用于IGFBP-7检测，需确认试剂盒适用性)
特异性： 本试剂盒特异性识别天然和重组兔IGFBP-7。与其他兔IGFBP家族成员的交叉反应性[供应商应说明，例如：未检测到与IGFBP-1, -2, -3, -4, -5, -6的显著交叉反应]。与人、小鼠、大鼠等物种的IGFBP-7无交叉反应性或交叉反应性极低。
试剂盒主要组分
微孔板 (Microplate): 预包被抗兔IGFBP-7抗体的96孔板 (8孔x12条)。
标准品 (Standards):[例如]冻干或液体的重组兔IGFBP-7蛋白。[说明复溶体积](例如 2000 pg/mL 起始浓度，梯度稀释)。数量[例如]6-8个点。
检测抗体 (Detection Antibody):[例如]生物素标记的抗兔IGFBP-7抗体 (浓缩液，使用时需稀释)。
酶结合物 (Enzyme Conjugate):[例如]HRP标记的链霉亲和素 (Streptavidin-HRP) (浓缩液，使用时需稀释)。
显色底物 (Substrate Solution): TMB (3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine) 溶液。
终止液 (Stop Solution):[通常是]酸性溶液 (如稀硫酸、盐酸)。
洗涤缓冲液 (Wash Buffer):[通常是]浓缩的PBS-Tween或其他缓冲液，使用前需稀释。
样本稀释液 (Assay Diluent): 用于稀释标准品、样本或检测试剂的缓冲液。
封板膜 (Plate Sealer): 用于温育时覆盖微孔板。
说明书 (Instruction Manual): 必须包含！
储存条件：
未开封试剂盒：[通常]2-8°C 避光保存（勿冷冻）。标准品可能需 -20°C 保存（请参看具体标签）。
复溶后的标准品：[通常]-20°C 分装保存，避免反复冻融。
其他液体组分(已开盖)：[通常]2-8°C 避光保存，在规定时间内使用完（通常数周）。
有效期： [例如]自生产日期起 12 个月（具体参看试剂盒外包装标签）。
试验所需器材
酶标仪 (Microplate Reader): 可读取450nm吸光度（带参考波长校正能力更佳）。
移液器及配套吸头。
振荡器（或手动摇晃）。
去离子水或蒸馏水。
吸水纸（用于洗板后拍干）。
涡旋混匀器（用于标准品复溶、稀释）。
计时器。
试管用于稀释样本和试剂。
试验流程概述
准备试剂/样本： 复溶标准品并稀释至系列浓度。根据预实验结果稀释样本。稀释检测抗体和酶结合物（如需）。
加样 & 捕获： 向预包被板孔中加入标准品、稀释样本、质控品及空白对照 (仅稀释液)。覆盖封板膜，室温或37°C（按说明书要求）温育[例如 1-2小时]。
洗涤： 吸弃孔内液体，用稀释好的洗涤液洗涤孔板数次 (每次需拍干)。
加检测抗体： 加入稀释好的生物素标记检测抗体。覆盖封板膜，室温或37°C温育[例如 1小时]。
洗涤： 同步骤3。
加酶结合物： 加入稀释好的HRP-链霉亲和素。覆盖封板膜，室温避光温育[例如 30分钟]。
洗涤： 同步骤3（洗涤次数可能比之前多）。
显色： 加入TMB底物溶液，室温避光温育[例如 15-30分钟]，密切观察颜色变化。
终止： 每孔加入终止液终止反应，颜色由蓝变黄。
读数： 30分钟内 (或按说明书要求) 在酶标仪上读取450nm波长下的OD值 (推荐同时使用540nm或570/630nm作为参考波长)。
计算结果： 使用四参数逻辑曲线拟合 (4PL) 或其他指定方法绘制标准曲线。根据标准曲线计算样本中IGFBP-7浓度，再乘以稀释倍数，得到最终浓度。
质量控制：
标准曲线： R²值应 >0.990（或按说明书要求）。OD值应随标准品浓度增加而增加。
空白对照： OD值应低于最低标准品的OD值或低于某个阈值（说明书会说明）。
重复性： 同一样本做复孔，CV(变异系数)应<15-20%(低浓度样本可能稍高)。
预期值/回收率（可选）： 如果用已知浓度（如供应商质控品或掺入标准品的样本）测试，回收率应在[例如 80%-120%]范围内。
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