猪蓝耳病病毒通用型/高致病性猪蓝耳病病毒(PRRSV-U/PRRSV-M)检测试剂盒(双重荧光PCR法) 新品

猪蓝耳病病毒通用型/高致病性猪蓝耳病病毒(PRRSV-U/PRRSV-M)检测试剂盒(双重荧光PCR法)

简介：

核心检测原理

靶基因设计：

PRRSV-U检测：针对ORF7保守基因（核衣壳蛋白基因），FAM荧光通道标记

PRRSV-M检测：针对NSP2特征性缺失区域（第481-533位氨基酸），HEX/VIC荧光通道标记

探针技术：

采用TaqMan-MGB探针设计

探针长度18-22bp，Tm值控制在68-70℃

淬灭基团使用非荧光淬灭剂(NFQ)

扩增体系：

一步法RT-PCR技术

含UNG酶防污染系统

内参基因(β-actin)监控样本质量

二、性能指标验证：

参数  PRRSV-U检测  PRRSV-M检测  测试标准

灵敏度  102拷贝/mL  50拷贝/mL  10次重复检测

特异性  100%  100%  对PCV2等10种病原测试

重复性  CV≤5%  CV≤3%  3批次试剂验证

符合率  98.70%  99.20%  与测序结果对比

三、操作流程优化：

样本处理：

优选样本：急性期血清、肺组织、淋巴结

处理方法：

血清：200μL直接裂解

组织：研磨后使用配套RNA提取试剂

保存要求：-70℃可保存6个月

反应体系：

25μL反应体系：

2×RT-PCR Mix 12.5μL

双重引物探针混合液 2.5μL

模板RNA 5μL

RNase-free水 5μL

扩增程序：

逆转录：50℃ 10分钟

预变性：95℃ 3分钟

45个循环：

95℃ 10秒

60℃ 30秒（双通道同步采集荧光）

四、结果判读指南：

质控标准：

阳性对照：Ct≤30

阴性对照：无扩增

内参基因：Ct≤32

结果判定：

PRRSV-U阳性：FAM通道Ct≤35且曲线典型

PRRSV-M阳性：HEX通道Ct≤35且曲线典型

混合感染：双通道均阳性且ΔCt≤5

可疑结果：35<Ct≤40，需复检

特殊情形处理：

单通道阳性：建议测序确认

内参异常：重新提取样本

公司正在出售的产品：

五、注意事项：

操作规范：

严格分区操作(试剂准备区、样本处理区、扩增区)

每批检测必须包含全套质控

生物安全：

在BSL-2实验室操作

废弃物料需121℃处理30分钟