马源性成分阳性对照

马源性成分阳性对照

一、阳性对照基本属性

产品类型：马(Equus caballus)源性DNA标准物质

适用检测：马源性成分荧光PCR检测试剂盒

浓度标示：10?拷贝/μL(经数字PCR绝对定量)

溯源信息：

来源：马肌肉组织标准样本(NCBI Taxonomy ID: 9796)

认证：通过CNAS标准物质认证(GB/T 27411-2012)

二、核心特征参数

分子特征：

靶序列：线粒体CYTB基因(GenBank登录号：NC_001640.1)

片段长度：126bp(包含检测试剂盒引物结合区)

GC含量：42.3%

性能指标：

纯度：A260/A280=1.82±0.05

稳定性：-20℃保存≥24个月，冻融耐受≤5次

均一性：批内CV<3%(n=10)

三、制备工艺流程

原料处理：

选用SPF级马肌肉组织

液氮速冻后机械粉碎

核酸制备：

酚-氯仿法提取基因组DNA

琼脂糖凝胶电泳纯化目标片段

定量标准化：

纳米滴定量初步标定

数字PCR绝对定量校准

分装冻干(每管20μL)

四、质量控制体系

表：质控项目与标准

检测项目   方法   接受标准

浓度验证   ddPCR   9.8×10?-1.1×10?拷贝/μL

物种特异性   BLAST   仅匹配马属序列

无菌检测   培养法   无微生物生长

抑制物检测   加标回收   回收率≥95%

五、使用注意事项

解冻程序：

室温平衡10分钟后轻柔混匀

避免剧烈震荡产生气泡

工作液配制：

推荐用试剂盒配套稀释液

梯度稀释时更换枪头

实验应用：

每批检测需包含2个浓度水平(103和10?拷贝/μL)

扩增曲线应为典型S型(Ct值±1在预期范围内)

失效特征：

液体变浑浊或有沉淀

冻干粉溶解不完全

连续3次检测Ct值偏移>2个周期

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