商品属性:

产品名称 | 马梨形虫病 (Piroplasmosis)检测试剂盒(双重荧光PCR法) | 检测方法 | 荧光PCR法 |
货号 | XG-P1163 | 应用范围 | 核酸的定性检测 |
规格 | 50T | 用途 | 仅供科研研究实验 |

一、 什么是马梨形虫病(Piroplasmosis)?

马梨形虫病,又称为马巴贝斯虫病,是一种由蜱虫传播的血液原虫病。其主要病原体是:
驽巴贝斯虫(Babesia caballi)
马巴贝斯虫(Theileria equi)
危害:感染后,马匹会出现高热、贫血、黄疸、血红蛋白尿(酱油色尿)、精神沉郁甚至死亡。该病是国际贸易中必须检测的OIE(世界动物卫生组织,现称WOAH)列名疾病,对马业经济危害巨大。
二、 检测方法概述:什么是双重荧光PCR法?

传统的检测方法(如血液涂片镜检)灵敏度低,血清学方法(如ELISA)无法区分活动性感染与既往感染。荧光PCR法,特别是双重荧光PCR,是目前最先进、最可靠的诊断技术。
PCR(聚合酶链式反应):一种分子生物学技术,能在体外对特定的DNA片段进行指数级扩增,即使样品中病原体含量极低也能检测出来。
荧光PCR(实时荧光定量PCR):在PCR反应体系中加入荧光探针或染料。随着DNA的扩增,荧光信号不断增强,仪器实时监测荧光值,从而实现对起始模板DNA的定量分析。它不仅能够判断“有”或“无”,还能大致推测病原体的数量。
双重荧光PCR:在一个反应管中同时加入两套引物和探针,分别针对驽巴贝斯虫(B. caballi) 和马巴贝斯虫(T. equi) 的特异性基因片段。这两套系统使用不同颜色的荧光报告基团(如FAM标记探针检测B. caballi,VIC/HEX标记探针检测T. equi)。因此,一次检测即可同时鉴别两种病原体,大大提高了检测效率。
核心优势:
高灵敏度:能检测出极低浓度的病原体,适用于早期诊断和隐性感染筛查。
高特异性:针对病原体独特基因序列,结果准确,交叉反应少。
快速:整个流程可在2-4小时内完成。
定量能力:可评估感染严重程度(菌/虫血症水平)。
双重检测:一份样品,一次实验,同时获得两种病原体的结果。
三、 试剂盒组成

一个典型的试剂盒通常包含以下组分:
PCR反应液:包含PCR反应所需的缓冲液、dNTPs、Mg2?等。
酶混合物:热启动Taq DNA聚合酶等。
双重荧光PCR预混液:已含有针对B. caballi和T. equi的特异性引物和荧光探针。
阳性对照:含有已知浓度的B. caballi和T. equi的特异性DNA片段,用于验证实验是否成功。
阴性对照:无核酸水或已知阴性样本,用于监控是否存在污染。
内标(可选但重要):用于监控DNA提取过程和PCR反应本身是否正常,避免假阴性结果。
四、 检测操作流程(简要步骤)

注意:操作需在专门的分子生物学实验室进行,并严格分区(试剂准备区、样本处理区、扩增分析区),防止污染。
样本采集与处理:
样本类型:抗凝全血(EDTA抗凝为佳)。
核酸提取:使用商业化的核酸提取试剂盒从血液样本中提取总DNA。这是关键步骤,提取的DNA质量和纯度直接影响检测结果。
试剂准备与加样:
在冰上或超净工作台中,按照说明书计算并配制PCR反应体系。例如:
PCR反应液 + 酶混合物 + 双重荧光PCR预混液 + 模板DNA。
将配制好的反应体系分装到PCR管或96孔板中,然后加入提取好的样本DNA、阳性对照和阴性对照。
荧光PCR扩增:
将PCR管/板放入实时荧光PCR仪中。
设置循环程序(通常如下):
阶段1:预变性 - 95°C, 2-5分钟。使DNA完全变性为单链。
阶段2:循环扩增(40-45个循环):
变性:95°C, 10-15秒。使双链DNA解开。
退火/延伸:60°C, 30-60秒。引物与模板结合,酶合成新链并采集荧光信号。此步骤是关键。
结果分析:
程序结束后,仪器软件会自动生成扩增曲线和Ct值。
公司正在出售的产品:

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细菌茁糖酵解酚红琼脂平板 | HBeAg结合蛋白4/甘油激酶抗体 |
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关键字: 马梨形虫病;检测试剂盒;双重荧光PCR法;
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