麻疹病毒 / 风疹病毒检测试剂盒(双重荧光 PCR 法 )
简介：
麻疹病毒（Measles virus, MV）和风疹病毒（Rubella virus, RV）是两种具有高度传染性的病原体。风疹病毒感染对孕妇尤为危险，可能导致先天性风疹综合征，造成胎儿先天性心脏病、耳聋、白内障等严重缺陷。
本试剂盒采用双重实时荧光逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术，用于定性检测人血清、血浆、咽拭子、尿液或脑脊液等样本中的麻疹病毒和风疹病毒核酸。
产品名称 | 麻疹病毒 / 风疹病毒检测试剂盒(双重荧光 PCR 法 ) | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1174 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
核心优势：
一管双检：在同一个反应管内同时检测两种病毒，提高效率，节省样本和试剂。
高灵敏度与特异性：能早期、快速发现感染，准确区分麻疹和风疹病毒感染（两者早期症状相似）。
快速诊断：为麻疹的暴发监控和风疹的孕期风险预警提供关键的病原学证据。
二、 检测原理
麻疹病毒和风疹病毒的遗传物质均为单股RNA，因此检测需先经过逆转录（RT） 将其转化为cDNA，再进行PCR扩增。
核酸提取：从处理的样本中提取总病毒RNA。
逆转录与双重荧光PCR扩增：
逆转录：在反应的第一步，逆转录酶将病毒RNA模板逆转录为cDNA。
特异性引物与探针：试剂盒包含两套独立的引物和探针系统：
麻疹病毒检测系统：针对麻疹病毒高度保守的基因（如N蛋白基因）设计特异性引物和一条特异性的荧光探针。该探针通常标记有报告基团（如FAM），发射绿色荧光。
风疹病毒检测系统：针对风疹病毒高度保守的基因（如E1蛋白基因）设计特异性引物和另一条特异性的荧光探针。该探针通常标记有另一种报告基团（如VIC/HEX/CY5），发射不同于FAM的荧光（如黄色或红色）。
实时检测与区分：在PCR仪进行扩增时，两套系统在同一反应管内同时工作。仪器在每轮循环结束后，会在两个不同的荧光通道分别采集信号。
如果样本中含有麻疹病毒核酸，则FAM通道的荧光信号会增长。
如果样本中含有风疹病毒核酸，则VIC通道的荧光信号会增长。
如果两者皆有，则两个通道的信号都会增长。
Ct值判定：与单重PCR原理相同，根据各通道荧光信号达到阈值的循环数（Ct值）来判断病毒核酸的初始含量。
三、 试剂盒组成（以典型试剂盒为例）
PCR反应液：包含缓冲液、dNTPs等。
酶混合物：包含热启动Taq DNA聚合酶和逆转录酶的混合酶。
麻疹病毒阳性对照：含有麻疹病毒特定核酸片段。
风疹病毒阳性对照：含有风疹病毒特定核酸片段。
阴性对照：无核酸酶水。
内标（Internal Control, IC）：优质试剂盒会含有内标，通常标记有第三个荧光通道（如ROX/CY5），用于监控从核酸提取到扩增的全过程，有效避免假阴性。
四、 操作步骤（简要流程）
前提： 在标准分子生物学实验室进行，严格分区操作，防止污染。
样本采集与处理：根据临床要求采集咽拭子、血清等样本，并进行适当处理。
核酸提取：使用商业化RNA提取试剂盒提取病毒RNA。建议在提取时加入内标（如果内标非预混在反应液中）。
反应体系配制：在试剂准备区，将PCR反应液、酶混合物等配制为主反应混合液。
加样：将主反应混合液分装至PCR管，然后分别加入提取的样本RNA、阳性对照和阴性对照。
上机扩增：将反应管放入实时荧光PCR仪，设置好双重检测程序。典型程序如下：
逆转录：50℃ 10-30分钟。
预变性：95℃ 2-5分钟。
PCR循环（40-45个循环）：95℃ 10-15秒（变性），55-60℃ 30-60秒（退火/延伸，在此阶段同时采集FAM和VIC两个通道的荧光信号）。
结果分析：仪器软件自动分析各通道的扩增曲线和Ct值。
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