副溶血性弧菌检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
试剂简介:
副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种常见的食源性病原菌,主要污染海产品,可引起食物中毒和急性肠胃炎。
PCR-荧光探针法因其高灵敏度和特异性,被广泛应用于副溶血性弧菌的快速检测。
产品名称 | 副溶血性弧菌检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1384 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
检测原理:
基于实时荧光定量PCR技术,通过特异性引物和荧光探针,针对副溶血性弧菌基因组中的保守区域(如毒素调控基因toxR)设计引物和探针
在PCR扩增过程中,荧光信号随细菌核酸扩增产物的增加而增强,通过实时监测荧光信号变化,实现对副溶血性弧菌核酸的定性和/或定量检测。
检测样本:
主要采集疑似污染的海产品(如鱼类、贝类、甲壳类)、食物、水样等样本。
操作步骤(以典型试剂盒为例):
样本采集与核酸提取:
采集可疑食物或海产品样本,进行适当处理(如匀浆、研磨)后,提取样本中的总DNA,确保核酸质量和纯度。
PCR反应体系配置:
根据试剂盒说明书,配制PCR反应体系,包括模板DNA、特异性引物、荧光探针、PCR缓冲液、dNTPs、Taq酶等。
每个样本设置技术重复,同时设立阳性对照、阴性对照和空白对照。
PCR扩增与检测:
将反应管放入实时荧光定量PCR仪中,设置扩增程序(通常包括预变性、变性、退火延伸等步骤)。
实时监测荧光信号,记录Ct值(循环阈值)。
结果分析:
通过PCR仪配套软件分析荧光信号,判断样本中是否存在副溶血性弧菌核酸。
根据Ct值判断阳性或阴性,通常Ct值越小,表示细菌载量越高。
操作特点:
高灵敏度与特异性:荧光PCR法能够检测到极低浓度的副溶血性弧菌核酸,且特异性高,减少假阳性结果。
快速检测:整个检测过程通常在数小时内完成,适合快速诊断和食品安全监控。
定量与定性分析:不仅可以定性检测副溶血性弧菌核酸的存在,还可以通过Ct值进行半定量分析。
自动化兼容:适用于自动化核酸提取和PCR检测平台,适合大规模样本筛查。
注意事项:
严格分区操作:为避免交叉污染,实验应分为试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区,各区物品专用。
对照设置:每次实验应设置阳性对照、阴性对照和空白对照,确保实验结果的准确性。
试剂保存:试剂盒中的试剂应按照说明书要求保存,通常需避光、低温保存,避免反复冻融。
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关键字: 副溶血性弧菌;检测试剂盒;PCR-荧光探针法;
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