6-磷酸葡萄糖胺合成酶(GlmS)/6-磷酸果糖谷氨酰胺氨基转移酶(GFAT)试剂盒微板法/48样
产品简介:
6-磷酸葡萄糖胺合成酶(GlmS,EC 2.6.1.16)又名 6-磷酸果糖谷氨酰胺氨基转移酶(GFAT),是氨基己糖合成代谢途径中第一步反应的催化酶,也是限速酶,该代谢途径的终产物鸟苷氮乙酰葡萄糖胺是生命体糖蛋白的前体和一些真菌细胞壁主要成分几丁质的合成单体。6-磷酸葡萄糖胺合成酶(GlmS)催化谷氨酰胺和 6-磷酸果糖合成 6-磷酸葡萄糖胺和谷氨酸,本试剂盒通过检测生成谷氨酸的速率进而计算得出该酶活性的大小。
反应方程:L-glutamine + D-fructose 6-phosphate = L-glutamate + D-glucosamine 6-phosphate。
试剂盒组成和配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 提取液60mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 粉体mg×1瓶 | 4℃保存 | 临用前甩几下,使粉体落到底部,再加入1.2mL 蒸馏水溶解备用。 |
试剂二 | 液体 25mL×1 瓶 | -20℃保存 |
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试剂三 | 粉体mg×1 支 | 4℃保存 | 临用前甩几下,使粉体落到底部,再加入1.2mL 蒸馏水溶解备用。 |
试剂四 | 液体1mL×1 支 | 4℃保存 |
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试剂五 | 粉体mg×1 支 | -20℃保存 | 临用前甩几下,使粉体落到底部,再加入1.1mL 蒸馏水溶解备用 |
标准品 | 粉 体 m g × 1 支 | 4℃保存 | 若重新做标曲,则用到该试剂。 |
所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
6-磷酸葡萄糖胺合成酶活性检测:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:
① 组织样本:
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 12000rpm ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
[注]: 若增加样本量,可按照组织质量(g): 提取液体积(mL) 为1:5~10的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
[注]:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。
③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清液检测。
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