产品信息：
产品名称 | WERI-Rb-1+egfp+luc 人视网膜母细胞瘤 | 英文名称 | WERI-Rb-1+egfp+luc：WERIRb1egfpluc |
货号 | AXB10519 | 生长特性 | 贴壁生长 |
用途 | 仅用于科研 实验 | 种属 | 人 |
源自1岁女性视网膜母细胞瘤组织，由R.M. McFall和T.W. Sery于1974年建立。
基因修饰：稳定表达绿色荧光蛋白（EGFP）和荧光素酶（LUC），适用于活体成像及定量检测。
应用领域：
视网膜母细胞瘤致瘤机制研究
肿瘤治疗动物模型（如裸鼠移植瘤）
药物筛选及基因转染效率评估。
形态与生长
形态：圆形细胞聚集成葡萄状簇（悬浮生长）。
倍增时间：约38-48小时（37℃条件下）。
致瘤性：具有强致瘤性，需在BSL-1实验室操作。
培养操作指南
培养体系与条件
基础培养基 RPMI-1640
添加成分 10%胎牛血清（FBS） + 1%青霉素-链霉素（P/S）
培养环境 温度：37℃ ；
气相：空气95% + CO? 5%
传代比例 1:2至1:3（细胞密度80%-90%时传代）
冻存条件 55%基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO，液氮储存
操作步骤
复苏
37℃水浴快速解冻冻存管，加入含4-6 mL完全培养基的离心管混匀，离心（1000 RPM，5分钟）后重悬接种至T25瓶。
关键点：次日换液去除死细胞，连续观察2-3天。
传代
悬浮细胞直接传代：收集细胞悬液离心（1000 RPM，5分钟），弃上清后用完全培养基重悬，按1:2比例分瓶。
注意事项：
避免过度离心（≤1000 RPM） ；
操作全程轻柔，防止气泡损伤细胞。
冻存
汇合度80%时收集细胞，离心后用冻存液重悬，程序降温（-1℃/min）至-80℃后转入液氮。
关键注意事项
荧光标记维护
EGFP检测：每周用荧光显微镜观察表达强度（激发波长488 nm）。
LUC活性验证：每月用荧光素酶检测试剂盒定量（推荐Promega GloMax）。
污染防控
定期检测支原体（PCR法），避免真菌污染（培养基中可添加两性霉素B）。
所有操作需在生物安全柜内进行，废液需灭菌处理。
活率监控
台盼蓝染色法每日检测活率（活率＜90%需优化培养条件）。
细胞结团处理：轻柔吹打+预热培养基（37℃）。
常见问题与解决方案
问题 原因 解决方案
荧光信号减弱 传代次数过多或抗生素失效 每10代用嘌呤霉素（2-4 μg/mL）巩固筛选
细胞活性低 消化过度或冻存复苏损伤 缩短离心时间，优化冻存程序
细胞结团 吹打力度不足或血清批次差异 轻柔吹打+预热培养基
公司正在出售的产品：
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Rhesus antibody Rh CCDC40 卷曲螺旋结构域蛋白40抗体 规格 0.2ml | Anti-CDK1/Cdc2 周期素依赖性激酶1抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml |
关键字： WERI-Rb-1+egfp+luc; 人视网膜母细胞瘤;贴壁细胞;
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