伯氏疏螺旋体(BB)检测试剂盒(荧光PCR法)
试剂简介：
一、试剂盒核心信息
检测目标
特异性检测**伯氏疏螺旋体（B. burgdorferi sensu lato复合群）**的DNA，包括：
鞭毛蛋白基因（flaB）——高保守靶点，属水平检测
外膜蛋白基因（ospA或ospC）——分型鉴别（如B. burgdorferi sensu stricto vs B. afzelii）
覆盖病原型：莱姆病主要致病种（欧亚B. garinii/B. afzelii，北美B. burgdorferi ss）。
产品名称 | 伯氏疏螺旋体(BB)检测试剂盒(荧光PCR法) | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1562 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
方法原理
双重荧光PCR：
flaB-FAM探针（通用检测） + ospA-HEX探针（分型），内标（Cy5）监控提取与扩增。
采用抗抑制剂聚合酶，适配高蛋白样本（如关节液）。
适用样本
临床：皮肤活检（游走性红斑）、关节液、脑脊液（神经莱姆病）
媒介：蜱虫（全虫或中肠匀浆）
二、试剂盒组分与操作流程
PCR预混液 含热启动Taq酶、dNTPs、优化缓冲液（适配高多糖/蛋白样本）
探针引物混合液 flaB-FAM/ospA-HEX探针，内标（人工合成DNA，Cy5标记）
阳性对照 灭活B. burgdorferi B31株DNA
DNA提取试剂 磁珠法（兼容蜱虫几丁质复杂样本）
2. 操作步骤
样本处理：
皮肤组织：液氮研磨后裂解，离心取上清。
蜱虫：75%乙醇表面消毒，PBS匀浆后提取DNA。
PCR程序（30μL体系）：
95℃ 5min → [95℃ 10s → 60℃ 30s]×45 cycles（FAM/HEX/Cy5同步采集）
三、性能与结果解读
1. 关键参数
指标 性能要求
灵敏度 1拷贝/μL（纯DNA）
特异性 不与回归热疏螺旋体、钩端螺旋体交叉
抗干扰性 耐受10%关节液或蜱组织杂质
2. 结果判读
阳性：
flaB（FAM）Ct≤35 → 伯氏疏螺旋体感染。
ospA（HEX）Ct≤35 + 熔解曲线分析 → 种水平鉴别（如B. afzelii熔解峰78℃）。
无效检测：内标（Cy5）无扩增 → 需复查采样或提取步骤。
四、注意事项
采样时效性
游走性红斑期（早期局部感染）检出率＞90%，晚期样本（如关节炎）需提高采样量。
生物安全
伯氏疏螺旋体属三类病原，实验废弃物需121℃高压灭菌。
局限性
不能区分活菌/死菌，PCR阳性需结合抗体检测（如Western Blot）确认活动性感染。
五、应用场景
临床诊断：莱姆病早期确诊（抗体窗口期前），尤其疫区不明原因发热病例。
媒介监测：蜱虫带毒率调查（如全沟硬蜱的病原筛查）。
科研应用：菌株遗传变异分析（ospC基因分型关联致病性）
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关键字： 伯氏疏螺旋体;检测试剂盒;荧光PCR法;
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