产品介绍：
检测原理
采用双抗体夹心法，预先包被抗TNF-R1抗体的酶标板中加入标准品和待测样本，孵育后洗去未结合成分。
加入生物素标记的检测抗体，与结合在包被抗体上的TNF-R1结合，再加入HRP标记的链霉亲和素。
加入TMB底物液显色，酸终止反应后，用酶标仪在450nm波长测OD值，通过标准曲线计算样本中TNF-R1浓度。
产品名称 | 兔TNF-R1elisa试剂盒 | 英文名称 | Rabbit TNF-R1 ELISA Kit |
规格 | 48T/96T | 货号 | A130056 |
试剂盒组成
酶标包被板：12孔×8条
标准品：0.3mL×6管（浓度依次为320、160、80、40、20、0ng/L）
20倍浓缩洗涤液：25mL
生物素：1mL
酶标试剂：10mL
显色剂A液和B液：各6mL
终止液：6mL
封板膜：2张
说明书：1份
检测步骤
准备试剂和样本：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
设置加样孔：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置。
加标准品和样本：标准品孔中加入标准品50μL；空白对照孔不加。待测样本孔中先加入生物素10μL，再加待测样本50μL。
加酶标工作液：每孔加入酶标工作液100μL；空白对照孔不加。
温育：37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
洗涤：弃去液体，用洗涤液洗涤5-6次，拍干。
加底物液：每孔加入底物液A、B各50μL，避光温育15-30分钟。
加终止液：每孔加入终止液50μL，终止反应。
测定：使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中TNF-R1的含量。
注意事项
样本处理：确保样本清澈透明，避免溶血和反复冻融。
试剂保存：试剂盒储存在2-8℃，避免冻结，使用前检查试剂是否充分溶解。
实验操作：严格按照说明书操作，使用前混匀试剂，避免交叉污染。
底物液保存：底物液需避光保存，显色时间控制在30分钟内。
适用范围
本试剂盒专用于科研领域，不适用于临床诊断。
可检测兔血清、血浆、细胞培养上清液等样本。
主要优点缺点
维度 优势 (Pros) 劣势 (Cons)
检测性能 灵敏度极高，特异性强，结果准确 可能存在交叉反应，易受干扰物影响
操作体验 流程标准化，无需昂贵设备，适合高通量检测 步骤多且繁琐，耗时较长，对操作技巧有要求
经济成本 适合大批量样本检测，长期看性价比尚可 单次试剂成本较高，且不同批次可能存在差异
应用范围 可检测血清、血浆、细胞上清等多种样本 对样本质量（如是否溶血）敏感
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试剂与样本准备阶段
温度平衡（最容易被忽视的点）
操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。
后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。
样本处理
避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。
离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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