产品介绍：
产品名称 | 小鼠Endoglinelisa试剂盒 | 英文名称 | Mouse Endoglin ELISA Kit |
规格 | 48T/96T | 货号 | A129858 |
试剂盒组成
预包被抗小鼠Endoglin抗体的96孔板：1块
重组小鼠Endoglin标准品（冻干）：2管
生物素标记抗小鼠Endoglin抗体（100X）：1管
亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）（100X）：1管
样品稀释液：1瓶
抗体稀释液：1瓶
ABC稀释液：1瓶
TMB显色液：1瓶
终止液：1瓶
洗涤缓冲液（25X）：1瓶
封板膜：4张
检测原理
双抗体夹心法：预先包被的抗体为Endoglin单克隆抗体，检测相抗体为Endoglin多克隆抗体，经生物素标记。
显色反应：样品和生物素标记抗体加入酶标板孔反应后，洗涤，加入过氧化物酶标记的亲和素反应；再次洗涤后，加入底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠Endoglin呈正相关。
操作步骤
准备试剂和仪器：酶标仪（450nm）、恒温箱（37℃）、加样器等。
设置孔板：标准品孔、样本孔和空白对照孔。
加样：标准品和样本加入相应的孔中。
温育：封板后于37℃温育一定时间。
洗涤：去除未结合的物质。
加酶标抗体：加入HRP标记的检测抗体，温育后洗涤。
显色：加入底物溶液，避光孵育。
终止反应：加入终止液，测定OD值。
注意事项
样本处理：避免溶血、高血脂样本，组织匀浆需充分裂解。
试剂准备：浓缩洗涤液需按比例稀释，使用前充分摇匀。
操作规范：严格按照说明书操作，避免交叉污染。
结果分析：根据标准曲线计算样本浓度，注意稀释倍数。
应用领域
科研研究：用于研究Endoglin在小鼠血管生成、细胞信号转导等过程中的作用。
疾病机制：探索与Endoglin相关的疾病机制，如心血管疾病、肿瘤等。
主要优点缺点
维度 优势 (Pros) 劣势 (Cons)
检测性能 灵敏度极高，特异性强，结果准确 可能存在交叉反应，易受干扰物影响
操作体验 流程标准化，无需昂贵设备，适合高通量检测 步骤多且繁琐，耗时较长，对操作技巧有要求
经济成本 适合大批量样本检测，长期看性价比尚可 单次试剂成本较高，且不同批次可能存在差异
应用范围 可检测血清、血浆、细胞上清等多种样本 对样本质量（如是否溶血）敏感
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试剂与样本准备阶段
温度平衡（最容易被忽视的点）
操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。
后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。
样本处理
避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。
离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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