产品介绍:
禽流感病毒N2亚型(AIV-N2)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)是一种专门用于体外定性检测禽流感病毒N2亚型(Avian Influenza Virus N2 Subtype)核酸的分子诊断工具。
该试剂盒基于实时荧光定量RT-PCR技术(qRT-PCR),主要用于检测禽流感病毒的神经氨酸酶(Neuraminidase, NA)N2亚型。在禽流感病毒的分型中,N2亚型常与H3、H4、H5、H7等血凝素亚型组合出现(如H3N2、H5N2等)。该试剂盒对于禽流感病毒的精准分型、流行病学调查及病毒溯源具有重要意义。
产品名称 | 禽流感病毒N2亚型(AIV-N2)核酸检测试剂盒(荧光PCR法) |
产品分类 | 荧光PCR |
规格 | 50T |
货号 | AP3644 |
以下是关于该试剂盒的详细介绍:
检测原理与技术
该试剂盒主要采用TaqMan荧光探针法,通过特异性引物和探针靶向N2亚型的保守基因序列进行扩增和检测。
靶标基因:
NA基因(N2特异性保守区): 这是核心检测靶标,用于确认样本中是否存在N2亚型病毒。标记为FAM荧光素。
M基因(通用内参): 部分试剂盒采用双重检测系统,同时扩增甲型流感病毒通用的M基因(基质蛋白基因),标记为HEX/VIC荧光素,用于确认样本中存在甲型流感病毒,作为内部质控。
内标(IC): 部分试剂盒包含独立的内标通道(如ROX),用于监控整个反应过程,防止因提取失败或扩增抑制导致的假阴性。
技术原理: 由于流感病毒是RNA病毒,试剂盒采用一步法RT-qPCR。在扩增过程中,随着目标序列的指数级扩增,探针被酶切释放荧光信号,仪器实时监测信号变化。
�� 核心性能指标
指标 参数 说明
检测样本 泄殖腔拭子、咽喉拭子、禽肉/内脏组织、环境样本 适用于禽类临床及环境监测
检测下限 1×10³ copies/mL 灵敏度高,可检出微量病毒
特异性 强 不与N1、N8及其他亚型禽流感病毒发生交叉反应
检测时间 约1.5 - 2小时 含核酸提取及RT-PCR扩增步骤
保存条件 -20℃ ±5℃ 避光保存,避免反复冻融
�� 典型操作流程
样本采集: 采集禽类的泄殖腔拭子、咽喉拭子或发病禽的组织样本(如肺、脾、肝)。
核酸提取: 使用试剂盒配套的病毒RNA提取试剂(磁珠法或离心柱法)提取样本中的总RNA。
反应体系配制: 将提取的RNA模板、PCR反应液、酶混合物等按比例加入PCR反应管中。
上机扩增: 放入荧光定量PCR仪(如ABI 7500、Roche LightCycler等)中运行程序。
结果判读:
N2阳性: FAM通道出现典型的S型扩增曲线,且Ct值 ≤ 35-40,表明样本中存在N2亚型病毒核酸。
阴性: FAM通道无扩增曲线,或Ct值 > 40。
�� 临床与应用意义
病毒分型鉴定: 在确诊为甲型流感或Hx亚型后,进一步确认其神经氨酸酶亚型为N2,有助于明确病毒的具体组合(如H3N2、H5N2等)。
流行病学调查: 用于监测N2亚型在禽类(特别是水禽和陆禽)中的流行情况、变异趋势及跨种传播风险。
疫苗株匹配: 为疫苗研发和免疫程序制定提供数据支持,确保疫苗毒株与流行毒株的抗原性匹配。
跨种传播研究: N2亚型病毒在猪和禽中均有流行,监测禽源N2有助于研究其在不同宿主间的重配和进化。
⚠️ 注意事项
用途限制: 市场上大多数此类产品明确标注“仅用于科研”或“实验室专用”,不作为临床诊断的唯一依据,购买时需注意产品说明。
防污染: PCR实验室必须严格分区(试剂准备区、样本制备区、扩增区),操作人员需穿戴一次性手套和口罩,防止气溶胶污染导致的假阳性。
结果解读: 阳性结果表明存在N2亚型病毒核酸,但需结合样本的H亚型检测结果、临床症状及流行病学史进行综合判断。单纯的N2阳性不能代表病毒的致病力(高致病性或低致病性),需结合HA基因裂解位点序列分析。
PCR试剂盒的核心类型:
1. 常规PCR试剂盒
原理:通过引物扩增目标DNA片段,产物经琼脂糖电泳检测。
特点:操作简单、成本低,适用于定性检测(如牛疱疹病毒1型PCR试剂盒)。
典型应用:动物病原体筛查。
2. 荧光定量PCR(qPCR)试剂盒
探针法(TaqMan):
利用特异性探针结合目标序列,荧光信号实时监测扩增过程。
优势:高特异性(如牛白血病病毒试剂盒)、宽线性范围(10²–10⁷拷贝/μL)。
染料法(SYBR Green):
染料嵌入双链DNA发光,成本较低,但需优化引物特异性。
3. 恒温扩增试剂盒
技术:LAMP、RPA等,无需热循环仪,适合现场检测。
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关键字: 禽流感病毒N2亚型;AIV-N2;检测试剂盒;荧光PCR法;
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