马钱子探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 马钱子探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Semen Strychni Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5040 |
技术原理
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法，通过以下步骤实现高特异性检测：
探针设计：
5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。
扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，与靶序列累积量成正比。
检测流程：
逆转录（若检测RNA）：50℃ 30分钟生成cDNA。
预变性：94℃ 10分钟激活酶系统。
扩增循环（40次）：94℃ 15秒（变性），60℃ 1分钟（退火/延伸，采集荧光信号）。
产品特点
高灵敏度与特异性：
引物及探针针对马钱子高度保守区设计，避免与其他物种交叉反应。
检测下限可达10²拷贝/μL。
即开即用：
预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供样品DNA/RNA模板。
质量控制：
含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL无传染性DNA片段）和阴性对照，排除假阴性/污染干扰。
应用范围：
仅限科研使用，不可用于临床诊断。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 功能 |
| qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| 酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶（若需）及Taq DNA聚合酶 |
| 荧光探针 | 50μL | 靶标特异性检测 |
| 引物混合液 | 100μL | 扩增靶序列 |
| 阳性对照 | 50μL | 标准曲线建立 |
| 模板稀释液 | 1mL | 标准品梯度稀释 |
操作步骤
1. 标准曲线制备（10²–10⁷拷贝/μL梯度稀释）：
使用专用稀释液按10倍梯度稀释阳性对照，独立操作避免污染。
2. 样品制备：
提取样品DNA/RNA，建议设置阳性（PC）和阴性对照（NC）。
3. qPCR反应体系（20μL/管）：
| 组分 | 体积 |
| 缓冲液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 探针 | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL |
| 模板 | 5μL |
4. 上机程序：
按预设温度-时间程序运行，分析荧光信号（FAM通道）。
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。
定性检测：
阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型。
阴性：Ct≥40或无扩增。
可疑（35<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
操作分区进行，避免气溶胶污染。
使用带滤芯枪头，定期更换手套。
试剂解冻后需混匀，避免反复冻融。
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