检测原理
基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）探针法技术：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
定量分析：通过监测扩增过程中荧光强度的增长，计算Ct值，实现对目标RNA/DNA的定量或定性检测。
产品名称 | 乌梅探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Fructus Mume Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4951 |
产品特点
高灵敏度：可检测低至10²拷贝/μL的模板。
高特异性：引物及探针针对乌梅高度保守区域设计，避免交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供样品RNA模板。
内置对照：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）及阴性对照，确保结果可靠性。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 酶混合液 | 100μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |
| 引物混合液 | 100μL |
| 荧光探针 | 50μL |
| 阳性对照 | 50μL（1×10⁸拷贝/μL） |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），用于建立定量标准曲线。
2. RNA提取
使用兼容的RNA提取试剂盒制备样品RNA，建议设置阴/阳性提取对照。
3. qRT-PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积（μL） |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 引物混合液 | 2 |
| 荧光探针 | 1 |
| RNA模板 | 5 |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。
定性检测：
阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈典型S型。
阴性：Ct ≥ 40或无扩增。
可疑（35<Ct<40）：需重复检测。
注意事项
操作需在独立洁净区域进行，避免交叉污染。
阳性对照需最后加入反应体系。
试剂解冻后需充分混匀并置于冰上使用。
本产品仅限科研使用。
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