产品原理

基于实时荧光定量PCR技术(探针法),通过Taq酶的5’核酸外切酶活性切割与靶序列结合的荧光标记探针。探针5’端标记报告基团(如FAM),3’端标记淬灭基团。扩增过程中,探针被切割导致荧光信号释放,通过监测荧光强度变化实现靶序列的定量分析。
产品名称 | 土茯苓探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Rhizoma Smilacis Glabrae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4958 |

产品特点

高灵敏度与特异性:引物及探针针对土茯苓保守序列设计,避免交叉反应。
即开即用:预混缓冲液、酶及引物探针,仅需提供RNA模板。
内控设计:含阳性对照(1×10^8拷贝/μL),可区分假阴性结果。
兼容性:适配多数RNA提取试剂盒,支持20μL反应体系。
试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶及Taq酶 |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL | 标准品稀释及阴性对照 |
| 土茯苓引物混合液 | 100μL | 特异性扩增靶序列 |
| 土茯苓qRT-PCR探针 | 50μL | 荧光信号释放核心组分 |
| 阳性对照(1×10^8拷贝/μL) | 50μL | 反应体系质量控制 |
| 说明书 | 1份 | 操作指南 |
操作步骤

1. 标准曲线制备
按10倍梯度稀释阳性对照(10^2–10^7拷贝/μL),独立操作避免污染。
标记离心管(7-2号),依次稀释并冰上保存。
2. RNA提取
建议设置N+2样本(含阳性/阴性对照),使用兼容的RNA提取试剂。
3. qRT-PCR反应
体系配置(20μL/反应):
缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 探针1μL + 引物混合液2μL + 模板RNA 5μL。
程序设置:
逆转录:50℃ 30 min → 预变性:94℃ 10 min → 40循环(94℃ 15 sec,60℃ 1 min,FAM通道采集信号)。
数据分析
定量检测:以标准曲线log值为横轴,Ct值为纵轴,计算样本浓度。
定性判定:
阳性:Ct≤35,典型扩增曲线;
阴性:Ct≥40;
灰区(35<Ct<40):需复测确认。
注意事项

分区操作:样本处理、试剂配制、扩增需独立区域,避免交叉污染。
质量控制:每次实验需包含阴性对照(水)及阳性对照。
保存条件:试剂开封后需分装冻存,避免反复冻融。
生物安全:阳性对照为无传染性DNA片段,但仍需按生物危害废弃物处理。
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关键字: 土茯苓;探针法;PCR鉴定试剂盒;
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