通草探针法PCR鉴定试剂盒

核心原理

特异性探针设计：针对通草基因组高度保守的物种特异性基因序列，设计一条两端分别标记 ** 荧光报告基团（如 FAM）和淬灭基团（如 TAMRA）** 的寡核苷酸探针。

荧光信号机制：

探针完整时，报告基团荧光被淬灭基团吸收，无荧光信号。

PCR 扩增中，Taq 酶的5'→3' 外切酶活性水解与模板结合的探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光。

结果判定：荧光强度与扩增产物量成正比，通过Ct 值（循环阈值）实现对通草核酸的定性鉴定与相对 / 绝对定量。

适用范围：科研用途，适用于通草RNA的定性及定量检测。

产品特点

即开即用：用户仅需提供样品RNA模板，无需额外优化反应体系。

高灵敏度与特异性：引物及探针针对通草高度保守区设计，避免与其他病毒RNA交叉反应。

内置对照：提供阳性对照（1×10⁸ 拷贝/μL）以区分假阴性结果。

双重检测模式：支持定量分析（线性范围达5个数量级）和定性判断（Ct值阈值法）。

兼容性：可与多数RNA提取试剂盒联用，附赠核酸释放剂试用装（20次），支持免提取直接检测。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/包装 | 保存条件 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液（黄盖） | 500μL | -20℃避光 |

| 酶混合液（红盖） | 100μL | -20℃避光 |

| 荧光PCR模板稀释液（黄盖） | 1mL | -20℃ |

| 引物混合液（白盖） | 100μL | -20℃ |

| 探针（棕色管） | 50μL | -20℃避光 |

| 阳性对照（黄盖） | 50μL（1×10⁸拷贝/μL）| -20℃单独存放 |

| 核酸释放剂试用装（绿盖） | 1mL（20次） | 4℃ |

| 使用手册 | 1份 | - |

运输与保存：低温运输（干冰或冰袋），-20℃保存，有效期12个月。

实验步骤

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记6管（7-2号），每管加45μL稀释液。

依次从7号管（初始阳性对照）取5μL稀释至下一管，获得10⁷-10²拷贝/μL系列浓度，冰上暂存。

2. RNA提取

建议设置N+2个样本（含阳性/阴性对照），使用兼容的RNA提取试剂或核酸释放剂。

3. qRT-PCR反应（20μL体系）

| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| qRT-PCR缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| 探针 | 1μL | 1μL | 1μL |

| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| 模板RNA/标准品/水 | 5μL | 5μL水 | 5μL标准品 |

反应程序：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

40循环：94℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集FAM通道信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：

阴性：Ct≥40；阳性：Ct≤36；灰区（36<Ct<40）需复测。

阳性对照需有典型扩增曲线（Ct≤36），阴性对照无扩增（Ct≥40）。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

防污染措施：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸或75%酒精清洁台面。

质量控制：若阳性对照无信号或阴性对照出现扩增，实验无效需重做。

保存要求：探针及阳性对照需避光保存，避免反复冻融。

公司正在出售的产品