产品概述
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于首乌藤（Caulis polygoni multiflori）的特异性鉴定，适用于科研领域。试剂盒包含优化的引物和探针，具有高灵敏性、高特异性，支持定性和定量分析，可检测低至10 ng的DNA模板。
产品名称 | 首乌藤探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Caulis Polygoni Multiflori Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4973 |
试剂盒组成
PCR预混液：含荧光探针、dNTPs、聚合酶及缓冲液。
引物探针混合液：针对首乌藤保守区设计，预期产物长度560 bp（莼试生物）或特异性扩增片段。
阳性对照：无传染性DNA片段（1×10^7拷贝/μL）。
阴性对照：无核酸酶水。
核酸释放剂（选配）：适用于免提取样本处理。
实验步骤
1. 样本处理
DNA提取：使用柱式提取法或试剂盒配套核酸释放剂，建议设置阴性/阳性对照（N+2样本）。
阳性对照稀释：按10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL）建立标准曲线。
2. PCR反应体系（20/40 μL）
| 成分 | 体积（20 μL体系） |
| PCR预混液 | 10 μL |
| 引物探针混合液 | 2 μL |
| DNA模板 | 8 μL |
3. 扩增程序
预变性：95℃ 5 min
循环（35次）：95℃ 15 sec → 57℃ 15 sec → 72℃ 40 sec
延伸：72℃ 10 min
4. 结果分析
定量检测：以标准曲线计算样品浓度（Ct值-log浓度线性关系）。
定性检测：
阳性：Ct ≤ 36，典型扩增曲线；
阴性：Ct ≥ 40；
可疑（36<Ct<40）：需复测。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。
质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照，阴性对照无扩增、阳性对照Ct≤36方有效。
防污染措施：使用带芯吸头、紫外灯处理台面，实验后以10%次氯酸清洁。
适用范围：仅限科研，不适用于临床诊断。
常见问题解决
无扩增：检查RNA/DNA质量、抑制物残留或引物退火温度。
非特异性条带：优化Mg²⁺浓度或降低模板量。
弥散条带：减少循环次数或稀释模板。
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