检测原理
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用TaqMan探针法：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。当探针完整时，荧光信号被淬灭；PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放报告基团荧光信号。
定量分析：通过监测荧光信号增长（Ct值）实现靶标核酸的定性与定量检测，灵敏度可达几百拷贝/反应。
产品名称 | 麝香探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Moschus Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4982 |
产品组分
| 组分名称 | 规格/数量 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL ×1管 |
| 酶混合液 | 100μL ×1管 |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL ×1管 |
| 引物混合液 | 100μL ×1管 |
| 荧光探针 | 50μL ×1管 |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）| 50μL ×1管 |
| 阴性对照 | 50μL ×1管 |
操作步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），用于建立定量标准曲线。
2. 样本RNA提取
使用兼容的RNA提取试剂盒纯化样本RNA，建议设置阳性/阴性提取对照。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |
| qRT-PCR缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 荧光探针 | 1μL | 1μL | 1μL |
| 样本RNA/标准品 | 5μL | - | 5μL |
| 超纯水 | - | 5μL | - |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| PCR扩增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（40循环，采集FAM信号） |
结果判读
定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct≤35，扩增曲线呈典型S型。
阴性：Ct≥40或无扩增。
可疑（35<Ct<40）：需重复检测。
注意事项
储存与运输：-20℃避光保存，避免反复冻融。
污染控制：分区操作（样本制备区、PCR扩增区），使用带滤芯枪头。
适用范围：仅限科研，不可用于临床诊断或动物检疫。
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