桑叶探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品基本信息

规格：50次/盒（20 μL反应体系）

保存条件：-20℃避光保存，保质期12个月。

适用样本：植物RNA（需自备提取试剂）。

用途限制：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，靶序列扩增时Taq酶切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过Ct值与标准曲线比对，计算初始模板浓度；定性分析可通过阈值判定阳性/阴性。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/含量 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| 酶混合液（含逆转录酶） | 100 μL |

| 荧光探针 | 50 μL |

| 引物混合液 | 100 μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL |

| 模板稀释液 | 1 mL |

实验步骤

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记离心管（7至2号），依次稀释阳性对照至10²-10⁷拷贝/μL，冰上保存。

2. RNA提取

建议设置阴性对照（NC，超纯水）和阳性对照（PC，稀释阳性模板）。

兼容柱式或磁珠法RNA提取试剂盒。

3. qRT-PCR反应体系（20 μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA | 5 |

4. 反应程序

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

扩增（40循环）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性判定：

阳性：Ct ≤ 35或 ≤ 36，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct ≥ 40或无扩增。

可疑结果（35-40）：需重复实验确认。

注意事项

操作分区：试剂配制、样本处理、扩增需在独立区域进行，避免污染。

探针避光：防止荧光淬灭。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

仪器校准：定期校验qPCR仪荧光通道。

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