黄柏探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 黄柏探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Cortex Phellodendri Chinensis Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5086 |
预期用途
适用于黄柏（Phellodendron chinense）核酸的定性或定量检测，用于科研领域（如物种鉴定、成分分析），不适用于临床诊断或治疗。
检验原理
基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：
特异性引物和探针靶向黄柏DNA保守序列。
PCR扩增时，Taq酶切割探针释放荧光信号（FAM通道检测）。
通过荧光强度实时监测，实现核酸定性与定量分析。
试剂组成
| 组分 | 规格 | 备注 |
| 扩增反应液 | 19.5μL/管（主混合液） | 含dNTPs、酶、缓冲液 |
| 引物-探针混合液 | 0.5μL/管 | 特异性引物及TaqMan探针 |
| 阳性质控品 | 50μL（1×10^7拷贝/μL） | 人工合成DNA片段 |
| 阴性质控品 | 50μL | 无核酸酶水 |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL | 用于标准曲线制备 |
注：不同品牌组分略有差异，需按实际货号核对。
适用仪器
荧光定量PCR仪：ABI系列、Bio-Rad CFX、LightCycler、MX3000P等。
自备耗材：无核酸酶离心管（0.2mL/1.5mL）、滤芯吸头、离心机、移液器等。
样本要求
样本类型：植物组织、提取的DNA（纯度A260/A280≈1.8-2.0）。
保存与运输：短期-20℃，长期-70℃；避免反复冻融，冰袋运输（2-8℃）。
操作步骤
DNA提取：推荐使用商品化提取试剂盒（如Hypure病毒基因组DNA提取试剂盒）。
试剂配制：
解冻后涡旋混匀，离心分装（每反应管20μL体系：19.5μL反应液 + 0.5μL引物-探针混合液）。
加入5μL模板DNA（样本/阴阳对照）。
PCR扩增：
程序设置：
预变性：95℃ 3分钟；
40循环：95℃ 15秒 → 55-60℃ 30秒（采集荧光信号）。
结果分析：
阳性判定：Ct值≤35；
定量分析：通过标准曲线（10^1-10^6拷贝/μL梯度稀释）计算模板浓度。
注意事项
分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染。
不同批号试剂不可混用，阴性对照需无扩增曲线。
若用于定量，需每次实验建立标准曲线。
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