槐花探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 槐花探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Flos Sophorae Immaturus Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5088 |
产品原理
基于TaqMan探针技术，通过荧光定量PCR（qPCR）检测槐花特异性基因片段。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，扩增时Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，实时监测扩增曲线，实现定性与定量分析。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 用途说明 |
| qPCR缓冲液 | 500 μL | 提供反应体系基础环境 |
| qPCR酶混合液 | 100 μL | 含逆转录酶、Taq DNA聚合酶等 |
| 槐花特异性引物混合液 | 100 μL | 靶向槐花保守基因区域 |
| TaqMan探针 | 50 μL | 标记荧光基团的特异性探针 |
| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL | 验证实验有效性 |
| 模板稀释液 | 1 mL | 标准曲线制备及样品稀释 |
实验步骤
标准曲线制备（10^2~10^7拷贝/μL梯度稀释阳性对照）。
样本处理：
提取待测样本DNA（推荐柱式提取法）。
阴性对照（超纯水）与阳性对照同步处理。
反应体系配制（20 μL/反应）：
qPCR缓冲液 10 μL
酶混合液 2 μL
引物混合液 2 μL
探针 1 μL
模板DNA 5 μL
qPCR程序：
逆转录：50℃ 30 min（可选，若检测RNA需反转录）。
预变性：94℃ 10 min。
扩增：40循环（94℃ 15 sec → 60℃ 1 min，采集FAM信号）。
结果判读
定量分析：以Ct值为纵轴、标准品log拷贝数为横轴绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct≤35，扩增曲线呈指数增长。
阴性：Ct≥40或无扩增。
灰区（35<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免污染。
阳性对照与样本需分开存放，防止交叉污染。
仅限科研使用，不可用于临床诊断。
反复冻融≤7次，避免试剂失效。
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