检测原理
基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法（TaqMan原理）：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
实时检测：通过荧光强度增长定量分析初始模板浓度，动态监测扩增过程（Ct值）。
产品名称 | 肉桂探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Cortex Cinnamomi Cassiae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4997 |
试剂盒组成
| 成分 | 规格/功能说明 |
| qRT-PCR缓冲液 | 500μL（提供反应体系基础环境） |
| 酶混合液 | 100μL（含逆转录酶、Taq DNA聚合酶等） |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL（用于标准曲线制备） |
| 引物混合液 | 100μL（靶向Cortex cinnamomi保守区） |
| 探针 | 50μL（特异性荧光标记探针） |
| 阳性对照 | 50μL（1×10^8拷贝/μL，无传染性DNA片段）|
| 说明书 | 1份 |
实验步骤
1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）
标记离心管（7至2号），依次稀释阳性对照至10^7~10^2拷贝/μL，冰上保存。
2. 样品RNA提取
建议设置阴性对照（NC，水）和阳性对照（PC，稀释阳性模板）。
兼容多数RNA提取试剂（如柱式法或免提核酸释放剂）。
3. qRT-PCR反应体系（20μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板RNA/DNA | 5 |
| 超纯水（阴性对照） | 补足至20 |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 40个循环 | 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min（采集荧光） |
数据分析
定量分析：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性判定：
阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30。
样本Ct≤35为阳性，≥40为阴性；35<Ct<40需复测。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。
质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。
探针避光：反应液需避光保存，避免荧光淬灭。
耗材要求：使用带滤芯枪头，减少气溶胶污染。
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