黄嘌呤氧化酶(xanthione oxidase, XOD)试剂盒说明书
分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
XOD(EC 1.17.3.2)催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子,是活性氧主要来源之一;同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心,肺,肝脏等组织中,当肝功能受损时,XOD大量释放到血清中,对肝损害的诊断具有特异性的意义。
测定原理:
XOD催化黄嘌呤产生尿酸,尿酸在290nm下有特征吸收峰
试剂组成和配制:
产品名称 | OX003-50T/48S | OX003-100T/496S | Storage |
提取液:液体 | 60ml | 120ml | 4℃ |
试剂一:液体 | 60ml | 120ml | 4℃ |
试剂二:粉剂 | 4瓶 | 8瓶 | 4℃ |
试剂三:液体 | 2ml | 4ml | 4℃ |
说明书 | 一份 |
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自备仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至290nm,蒸馏水调零。
2、XOD检测工作液的配制:用时在每瓶试剂二中先加入0.42ml试剂三确保溶解混匀后,再加入试剂一定容至15ml,充分混匀,现配现用。
3、测定前将XOD检测工作液37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min。
4、取1mlXOD检测工作液于1ml石英比色皿中,再加入35μL样本,混匀,室温下立即测定290nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1.
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